免疫比濁技術及其在體外診斷領域(IVD)的應用

 

前情回顧時間分辨熒光技術在體外診斷(IVD)領域的應用

 

免疫比濁法Turbidimetric inhibition immunoassay)也被稱作免疫濁度法,是一種將現代光學測量儀器、自動分析檢測系統與抗原抗體免疫沉淀反應相結合的技術。當溶液中的抗原抗體發生特異性結合形成免疫復合物,免疫復合物會從液相析出使溶液產生一定的濁度,當有光線通過溶液時,光線在碰到抗原抗體復合物后就會產生折射或吸收,測定這種折射和吸收后的透射光或散射光,即可得到溶液的濁度,進而計算出樣品的含量。利用免疫比濁平臺能夠準確的對液體介質中的微量抗原、抗體、藥物及其他小分子半抗原物質進行測定,在臨床上具有廣泛的應用。

 

免疫比濁原理

 

當抗原與抗體在特殊稀釋系統中反應而且比例合適(一般規定抗體過量)時,形成小分子可溶性免疫復合物,形成的可溶性免疫復合物在稀釋系統中的促聚劑(聚乙二醇等)的作用下,自液相析出,形成微粒,使反應液出現濁度,當反應液中保持抗體過剩時,形成的復合物隨抗原量增加而增加,反應液的濁度亦隨之增加,反應液濁度與抗原含量呈正相關。當光線通過反應液時遇到這些微粒后會形成折射或吸收,對透射光或折射光強度進行測定即可得到反應液濁度。用一系列已知濃度的抗原標準品進行試驗,制備標準曲線,即可求出標本中抗原含量。

 

免疫比濁原理示意圖

免疫比濁原理示意圖

 

抗原抗體復合物形成與光濁度的關系

 

抗原抗體的比例是濁度形成的關鍵因素,反應物抗原與抗體的比例決定了復合物顆粒的大小??乖?抗體復合物形成可以分為三步:

  • 初步形成抗原-抗體二元復合物
  • 復合物交聯成大的網絡狀復合物;
  • 復合物產生絮狀沉淀。

 

抗原抗體在等價時,抗原和抗體全部結合,即無過剩的抗原,也無過剩的抗體,這時復合物的形成和解離相等;當反應液中抗體過量時,復合物隨著抗原量遞增至而增加,至抗原抗體量相當時反應液濁度達到最高點;當抗原過量時,復合物小,光散射少。所以在比濁法中必須在反應液中抗體過量時進行。

 

免疫比濁分類

 

按測定方法分類

按照測定方法的不同可以將免疫比濁分為終點濁度測定法和速率濁度測定法,前者是測定抗原與抗體結合反應完成后測定其復合物的量,后者是在抗原與抗體反應的最高峰(約1分鐘)測定其復合物形成的量。

 

按照檢測儀器分類

當光線遇到免疫復合物時會發生透射或散射,對透射光或散射光進行檢測均可測得反應液濁度,因此可以按照檢測儀器將免疫比濁分為免疫透射比濁法和免疫散射比濁法。

免疫透射比濁法:入射光線與光度接收器在同一水平面上的檢測方法,目前臨床應用較多的是免疫透射比濁技術。

免疫散射比濁法:入射光線與光度接收器不在同一水平面上的檢測方法(光度接收器與水平面形成0°到90°的夾角)

 

按照有無增強作用分類

按照有無增強作用可以將比濁分為普通免疫比濁膠乳增強免疫比濁。

普通免疫比濁:值抗原抗體直接反應產生濁度進行分析的方法。

膠乳增強免疫比濁:即指羧基化聚苯乙烯微球通過EDC偶聯上抗體,再于抗原反應,起到信號放大作用的方法。

 

免疫比濁試劑盒

在臨床診斷過程中,免疫比濁平臺由檢測儀器及免疫比濁試劑盒兩部分組成,下面就免疫比濁試劑盒做一介紹。免疫比濁試劑盒一般包含3部分:

檢測試劑:又分為試劑R1和試劑R2,試劑R1主要是緩沖鹽體系,提供抗原抗體比較適宜的反應條件;試劑R2主要成分就是抗體(膠乳比濁試劑盒R2試劑為偶聯上抗體的羧基化聚苯乙烯膠乳微球),R2試劑制備是免疫比濁試劑盒的核心技術。

校準品:為檢測試劑在生化儀上制作標準曲線的定制和抗原樣品。

質控品:為檢測試劑在生化儀上的重復性,穩定性的定值抗原樣品。

 

免疫比濁試劑盒評價

免疫比濁試劑盒評價主要包括以下內容:

精密度:包括批內精密度和批間精密度;

線性范圍:評價試劑在一定范圍內的線性程度;

準確度:評價試劑與其他廠家是否具有可比性;

抗干擾能力:評價試劑在一定干擾物質存在的條件下,測試值與理論值的差距是否在合理范圍內;

穩定性:包括上機開瓶穩定性,實時儲存穩定性及運輸穩定性;

?

臨床需求

目前人體中已發現的血漿蛋白有1000種以上,各自執行著不同功能,在研究中的約有500種,分離成純品的約有200種,在臨床上已應用的約有50種左右。這些特定蛋白在許多病理條件下會發生相應的變化,因此對其進行定量檢測,可以為臨床診斷,判斷療效,分析預后提供重要的依據。因為這些蛋白都具有”某一特定抗原性”,多采用免疫方法對其進行檢測。臨床對于定量的需求越來越強,促使免疫比濁法應運而生。

 

免疫比濁技術臨床上的應用

免疫功能監測:免疫球蛋白A、免疫球蛋白C、免疫球蛋白M、免疫球蛋白輕鏈k,免疫球蛋白輕鏈λ、補體C3、補體C4等。

心血管疾病檢測:載脂蛋白A1、載脂蛋白B、脂蛋白α等。

炎癥狀況檢測:C-反應蛋白、血清淀粉樣蛋白A、降鈣素原、銅藍蛋白等。

類風濕性關節炎檢測:類風濕因子、C-反應蛋白、抗鏈球菌溶血素O等。

腎臟功能監測:尿微量白蛋白、α1微球蛋白、β2微球、轉鐵蛋白、免疫球蛋白G等。

營養狀態監測:白蛋白、前白蛋白、轉鐵蛋白等。

新生兒體檢:C反應蛋白、免疫球蛋白A、前白蛋白、免疫球蛋白G等。

凝血及出血性疾病的檢測:抗凝血酶Ⅲ、觸珠蛋白等。

藥物濃度檢測:丁胺卡那霉素、卡馬西平、慶大霉素、苯巴比妥、苯妥因奎尼丁、妥布素等。

 

 

艾美捷科技有限公司,通過提供完整的產品和服務體系、便利的客戶關系和供應鏈管理,為生命科學研究工作者提供整體打包方案。我們的企業的核心價值觀:“學習、創新、合作、卓越”。作為一家具有尖端的技術實力、一流的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業,總部位于武漢光谷國家級高新技術開發區,服務面向全國。艾美捷科技是集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司,為用戶提供最前沿的專業資訊、完備的產品、整合的解決方案,及優質的物流服務。為了更好的服務客戶,公司組建了一支經驗豐富的研發團隊-艾美捷生物技術中心,進入研發生產階段,將更優質的產品推薦給國內生物領域的同仁們!

 

艾美捷科技與國內外優秀的生物試劑供應商保持著密切的合作關系,目前已成為眾多國際知名品牌的中國總代理或一級代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、開曼生物、Caisson Labs、Cytoskeleton、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等,可以在第一時間為用戶提供最前沿的專業資訊、完備的產品及物流服務。

 

艾美捷科技優勢代理品牌

發表評論

:?: :razz: :sad: :evil: :!: :smile: :oops: :grin: :eek: :shock: :???: :cool: :lol: :mad: :twisted: :roll: :wink: :idea: :arrow: :neutral: :cry: :mrgreen: