【Biotium力薦】TrueBlack 好用的脂褐素自發熒光淬滅劑

脂褐質是一種由高度自發熒光的氧化蛋白質和脂質顆粒組成的結構，這些顆粒會在老化細胞的溶酶體中積累。脂褐質顆粒在熒光顯微鏡檢查的各個通道中都會發出明亮的熒光，并且隨著年齡的增長在不同的細胞和組織類型中積累。因此，在成年人體組織或老年動物組織中，如果不采用相應的方法來抑制或遮蔽脂褐質的熒光，實際上是不可能對特定的免疫熒光信號進行成像的。

今天給大家帶來艾美捷代理品牌熒光領域領導者Biotium研發的TrueBlack? Lipofuscin Autofluorescence Quencher(貨號：23007)，可在用于免疫熒光染色的組織切片中淬滅脂褐素自發熒光。

TrueBlack的特點：

• 可消除脂褐質自發熒光
• 減少來自非脂褐質來源的自發熒光
• 與Sudan Black B不同，不會導致高背景
• 可在免疫熒光染色之前或之后使用
• 為人類和老年動物組織的熒光成像掃清了道路

TrueBlack?淬滅脂褐質背景熒光效果比Sudan Black B更好

傳統上，Sudan Black B已被用于在免疫熒光染色后通過用染料孵育組織切片來淬滅脂褐素自發熒光。然而，雖然它掩蓋了脂褐質的自發熒光，但Sudan Black B還在紅色和遠紅色通道中引入了均勻的非特異性背景熒光（圖1），從而限制了這些波長中熒光染料的使用。目前Biotium開發了TrueBlack? 作為Sudan Black B?的優越替代品。TrueBlack? 可淬滅脂褐質熒光，而紅色/遠紅色背景熒光的增加要少得多（圖1）。TrueBlack?處理可以在免疫染色之前或之后進行。它快速、簡單，對熒光抗體或核復染的信號影響最小，從而保持免疫染色的信噪比（圖2-3）。

圖1. 甲醇固定成人腦切片中的脂褐質自發熒光。在未經處理的組織（第一行）中，脂褐質以熒光顆粒的形式出現，在所有熒光通道中都發出熒光。蘇丹黑 B（第二行）掩蓋了脂褐質自發熒光，但在紅色和遠紅色通道中引入了背景。TrueBlack?（第三行）封閉了脂褐質，熒光背景增加最小。根據產品Protocol，甲醇固定的成人大腦皮層冷凍切片未經處理或用 70%乙醇中的0.1% Sudan Black B或1X TrueBlack? 染色。樣品在蔡司LSM 700共聚焦顯微鏡的 FITC(綠色)、Cy?3（紅色）和 Cy?5（遠紅色）通道中以相同的增益設置成像。

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TrueBlack? 處理可以在免疫熒光染色之前或之后進行:

圖2. 免疫熒光染色前使用 TrueBlack? 預處理淬滅脂褐質自發熒光。甲醛固定的人皮層冷凍切片未經處理 (A) 或用 TrueBlack? (B) 處理，然后用 CF?488A 抗 NeuN 抗體偶聯物（綠色）和 DAPI（藍色）染色。在蔡司 LSM700 共聚焦顯微鏡上的所有通道中對切片進行成像。A. 脂褐質在所有通道中都發出明亮的熒光，在未經處理的組織的合并圖像中顯示為白點（紅色箭頭）。B. TrueBlack? 預處理消除了脂褐質自發熒光，對特定染色的影響可以忽略不計。

圖3. 免疫熒光染色后使用 TrueBlack?后處理淬滅脂褐質自發熒光。人大腦皮層的甲醇固定冷凍切片先用兔抗GFAP染色，然后用 CF?640R 山羊抗兔（貨號: 20176）和DAPI（貨號: 40009）染色。切片未經處理或用TrueBlack?處理，然后安裝在 EverBrite 封固劑中（貨號: 23001）。未處理的切片（左）除了GFAP免疫熒光（膠質突起，品紅色）和DAPI染色(細胞核，藍色)外，還顯示出脂褐質自發熒光(白色箭頭)。TrueBlack?（右）消除了脂褐質熒光，同時為遠紅通道（品紅色）和核復染（藍色）中的 GFAP 免疫染色保持良好的信噪比。

TrueBlack?可以減少脂褐質以外來源的自發熒光

TrueBlack? 還可以減少來自其他來源的自發熒光，例如膠原蛋白、彈性蛋白、紅細胞和一般背景熒光。它在淬滅這些自發熒光源方面不如對脂褐質有效，但它可以改善人類和非人類組織類型的背景（圖4-5）。TrueBlack?還被用于淬滅聚碳酸酯濾光片上的背景熒光，這些濾光片常被用作成像細胞計數的細胞支持物。

圖4. TrueBlack? 可減少FITC、Cy?3和Cy?5通道中人腎切片中的非脂褐質自發熒光。人腎冷凍切片在冰冷的甲醇中固定，細胞核用DAPI（藍色）染色。自發熒光在Zeiss LSM 700 共聚焦顯微鏡上在所有通道中成像，兩個樣品的成像設置相同。底部：TrueBlack?處理。

圖5. TrueBlack?可減少大鼠腎臟組織切片中 FITC 通道中的非脂褐質自發熒光。將大鼠腎冷凍切片固定在甲醛中，未經處理 (A) 或用TrueBlack? (B)處理。細胞核用DAPI（藍色）染色。FITC通道（綠色）中的自發熒光在Zeiss LSM700 共聚焦顯微鏡上對每個樣品使用相同的成像設置進行成像。

TrueBlack? Plus：一種獨特的脂褐質淬滅劑，遠紅背景低于原版 TrueBlack?

Biotium 還開發了TrueBlack? Plus（貨號：23014），這是一種下一代脂褐素猝滅劑，其遠紅背景比原來的 TrueBlack?（貨號：23007）更低。TrueBlack? Plus 也是唯一一種可用于水性緩沖液而非70% EtOH的脂褐素淬滅劑，可延長厚組織樣品的孵育時間而不會收縮。

用于WB和免疫熒光（IF）的背景淬滅劑：

處理專門用于免疫組化中脂褐素淬滅劑TrueBlack? ，我們還提供用于清除蛋白質印跡（WB）背景的TrueBlack? WB Blocking Buffer Kit?（貨號：23013），以及用于阻斷免疫熒光（IF）非特異性染色的TrueBlack? IF Background Suppressor System (Permeabilizing)?（23012）。

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Biotium公司是一家在熒光技術領域獨樹一幟的生物技術公司，公司位于美國加利福尼亞的BAY AREA------世界上首要的生物科技中心。該公司一直致力于開發和生產用于生物醫學研究的熒光指示劑及其他特殊生化產品。其產品被廣泛應用于細胞生 物學、蛋白質組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經科學、血液流動檢測及大規模藥物篩選等眾多領域。Biotium公司專利產品眾多，包括已經被廣泛使用的實時PCR定量熒光染料EvaGreen、具有劃時代意義的凝膠核酸染料Gel Red和GelGreen，以及最新推出的Cheetah Taq熱啟動酶和CF系列蛋白質標記染料等。

目前，Biotium已將其許多專利技術授權給一些主要的國際生物技術公司，包括安捷倫、BD生物科學、Biolegend、BioRad、EMD Millipore、Illumina、PerkinElmer、Qiagen、Roche、Sartorius AG、Sigma-Aldrich、Thermo Fisher Scientific等。 ? 寶天生物科技(BTProbes)由美國知名熒光試劑企業Biotium公司于2007年在華成立，是一家專注于生物熒光試劑研發的高科技企業，是多家歐美企業長期供貨商，產品被廣泛應用于生命科學各個領域。目前寶天可提供超過100款熱賣的熒光蛋白(PE, APC)，其他熒光原料（FITC），用于PCR熒光原料（5-FAM，6-TAMRA）等。

作為Biotium在中國的區域總代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供最全面的Biotium的產品。