Biogradetech T細胞分選激活磁珠,T-Activator CD3/CD28 Beads實驗步驟說明

幾十年來,已經建立了許多體外刺激T細胞的方法,從不太特異的PHA促生物素,到更具針對性的抗CD3單克隆抗體,再到抗體包被的磁珠。其中大多數利用了T細胞生物學的優勢,主要針對T細胞受體(TCR)的結合,啟動足夠的細胞內信號轉導,推動有效的激活、增殖和分化。反過來,激活T細胞在基礎研究和臨床環境中具有多種用途。對激活T細胞的研究有助于詳細了解生物學現象,如免疫應答的啟動、細胞內信號傳導、胸腺細胞發育和T細胞記憶形成,以及T細胞功能障礙或衰竭。刺激不僅允許免疫細胞的長期培養,包括選擇和擴增單個細胞克隆,還可以提高基因修飾方法的效率。因此,T細胞激活也是基因工程T細胞制造過程中的一步,可實現高效的編輯和非克隆性擴增至臨床意義的劑量,選擇適當的T細胞刺激試劑以誘導足夠的T細胞反應非常重要。

現今典型的T細胞的刺激方法是基于至少雙價抗CD3和抗CD28抗體的刺激。多價結合是必要的,因為僅結合TCR(定義為信號1)不會引起完全的T細胞激活,而是導致非響應狀態。因此,除了TCR外,共刺激受體,尤其是CD28,必須提供支持性信號(稱為信號2)。CD28介導的共刺激與TCR信號協同作用,促進細胞存活、克隆擴增和分化。

 

 

Biogradetech人的T激活劑CD3/CD28由與人CD3和CD28抗體包被的4.5um磁珠組成,為人的T細胞的分離和擴增提供了簡單有效的方法。首先,該激活劑能夠輕松地從外周血單個核細胞(PBMCs)中分離和濃縮CD3+ T細胞。在分離后,磁珠上的抗CD3和抗CD28抗體的共價結合提供了調節T細胞激活和擴增所需的初級和共刺激信號。在細胞擴增過程中,細胞培養需要額外添加其他細胞因子,如人IL-2、IL-7和IL-15,以更高效地激活細胞。經過10-13天的培養期,激活的細胞可以擴增1000倍。

貨號 名稱 規格 應用
C-BETA2001-1mL Human T-Activator CD3/CD28, Beads

人T 細胞激活磁珠,CD3/CD28抗體偶聯磁珠

1mL CAR-T等T細胞培養技術的應用
C-BETA2001-10mL 10mL

 

實驗步驟(簡易漢化,請務必以英文原版說明書為準):

  1. 清洗T激活劑CD3/CD28抗體偶聯磁珠

1.1將人T激活劑CD3/CD28磁珠懸浮于管中(渦旋離心30秒以上,或傾斜和旋轉5分鐘)。

1.2將珠子轉移到容器中。

1.3 加入等體積的PBS(含1% HSA)。如果珠子體積小于1mL,添加1mL含有1% HSA的PBS進行懸浮。

1.4將管子放在磁鐵上1分鐘,然后棄掉上清液。

1.5將管子從磁鐵上取下,然后用相同體積的PBS(含1% HSA)重新懸浮珠子。

 

  1. 分離CD3+ T細胞:

2.1對于Ficoll分離的PBMCs,輕輕將細胞懸浮在PBS(含1% HSA)中,并將細胞密度調整為2-5×107個細胞/毫升。注意,細胞的總數不應超過2×108個細胞/毫升。

注意:在開始之前,通過流式細胞術確定樣品中CD3+ T細胞的百分比。

2.2將洗滌的珠子與PBMCs以3(珠子):1(CD3+ T細胞)的比例加入,如果細胞是純分離的T細胞,則將珠子與細胞的比例調整為1:1。

2.3以50~120轉/分鐘的速度旋轉樣品,并在室溫下孵育30分鐘。

2.4用T細胞培養基或含有1% HSA的PBS稀釋珠子和細胞的混合物,以確保磁選的分離體積。然后將管子放在磁鐵上1~2分鐘。

2.5移除上清液,然后用含有300 IU/mL IL-2的T細胞培養基重新懸浮珠子和細胞的混合物,并將細胞密度調整為0.5×10^6個細胞/毫升~1×10^6個細胞/毫升。

2.6將細胞懸浮液放入37℃、5% CO2的培養箱中。

 

  1. T細胞的激活和擴增:

3.1每天從培養的第3天開始計算T細胞的數量。

3.2在細胞擴增的后期,定期輕輕吹動培養中的細胞懸浮液,以分離珠子和細胞。

3.3當CD3+ T細胞數目>1×10^6個細胞/毫升時,加入含有IL-2的T細胞培養基稀釋細胞,并將細胞密度調整到約0.5×10^5個細胞/毫升。

3.4在培養結束時(第9-14天),計算細胞數目,并用磁鐵去除珠子。

 

實驗結果

C-BETA2001實驗結果

分離CD3細胞:PBMC與CD3/CD28抗體偶聯磁珠(貨號C-BETA2001)按照3:1的比例孵育30分鐘,然后用流式細胞術分析陽性(分離)部分的分離效率。

分離CD3細胞

激活純化的CD3+ T細胞:用CD3/CD28抗體偶聯磁珠(貨號C-BETA2001)激活純化的人CD3+ T細胞, 孵育48小時后,用APC標記的抗人CD25抗體和PE標記的抗人CD69抗體對細胞進行熒光染色,并用流式細胞術進行分析。

純化的CD3+T細胞擴增。用CD3/CD28抗體偶聯磁珠(貨號C-BETA2001)刺激純化的人CD3+T細胞。細胞在含有3001U/mL IL-2的T細胞培養基中擴增?;罨蟮募毎麛U增時間可達13天(左),細胞存活率較高(右)。

 

Biogradetech是生命科學和醫藥研發行業關鍵原料與試劑的供應商。他們提供廣泛的產品組合,包括細胞生物學、蛋白質組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經科學、血液分析和高通量藥物篩選等領域的試劑。Biogradetech的產品受到生物研究機構和生物制藥公司的高度追捧,他們以高質量、可靠性和服務而聞名。

 

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