全光譜SNAP-tag™* 底物——SiR 和 SPY™ 標記苯甲基鳥嘌呤 (BG) ?

 

SNAP-tagTM簡介

O6-鳥嘌呤烷基-DNA烷基轉移酶(O6-alkylguanine-DNA alky?ltransferase, AGT)是一種核蛋白,它通過把烷基化DNA鏈上鳥嘌呤O6-位的烷基轉移至自身活性中心的半胱氨酸上,來行使DNA修復功能。洛桑理工學院(Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne)Kai Johnsson博士科研小組發現,AGT可以特異性并快速地與苯甲基鳥嘌呤(benzylguanine, BG)衍生物發生反應,以共價鍵結合。隨后,研究人員通過對AGT進行突變改造,獲得了一種不與DNA鏈上的鳥嘌呤進行反應的蛋白,該蛋白不再定位于細胞核中,但與小分子BG衍生物的親和力卻大大地提高,而且只有22KDa大小?,F在,研究人員賦予了它一個廣為人知的名字——SNAP-tag。

 

SNAP-tag的優點

SNAP-tag無論在體內還是體外都可以特異性并快速與BG衍生物發生特異性反應,以共價鍵結合。由于BG可帶各種不同的其它化學基團,如生物素、熒光素(Fluorescein)、羅丹明(Rhodamine)等,從而實現一種標簽蛋白可以被多種配體標記,是一種革命性的自我標記蛋白標簽。

 

SNAP-tag大小為22kDa,在很多常見表達系統中都能夠良好表達。目前為止,已有相當數量和種類的蛋白質作為N末端和C末端SNAP-tag融合蛋白被成功表達出來。

 

SNAP-tagTM在蛋白質標記中具有三大優勢,可以廣泛應用于蛋白標簽的各個應用領域,是一種非常理想的蛋白標簽。

SNAP-tagTM的三大優勢

優勢 詳細內容
一個標簽,多種標記 免去構建融合蛋白的繁瑣操作流程
實驗環境多樣化 可以在活細胞或除去細胞的混合物中進行蛋白標記,然后在SDS-PAGE膠上直接檢測
實驗進展可實時監測 可以依據自身實驗要求添加探針,進行脈沖追蹤成像檢測
優點 詳細內容
高穩定性 SNAP-tagTM對側面基團替代的苯甲基鳥嘌呤進習性切割,將替代性的苯甲基集團轉移至活性位點并釋放出自由鳥嘌呤,如此獲得的硫醚鍵具有高穩定性;
高特異性 因為苯甲基鳥嘌呤在生化環境中十分穩定,而且沒有其他蛋白質會與此類物質發生反應,因此這種自我標記具有很高的特異性;
標記的多樣性 SNAP-tagTM對于可以連接的化合物的性質,沒有嚴格的限制,即SNAP-tagTM與苯甲基鳥嘌呤衍生物之間的結合反應不應受苯甲基鳥嘌呤是具有哪種“二級標簽”的影響,因此,SNAP-tagTM可以有多種配體,從而輕松實現標記的多樣性。

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SNAP-tagTM功能

SNAP-tagTM功能多樣,可以應用于各種不同的研究,主要包括:可在活細胞或細胞提取物中快速標記融合蛋白;可將蛋白質共價固定于固相介質表面,而無需進行之前的純化工作;可與蛋白酶配合,在把融合蛋白固定化后,純化目的蛋白,捕獲蛋白復合物;可直接在SDS-PAGE膠中檢測SNAP-tagTM融合蛋白。

SDS-PAGE膠中檢測SNAP-tagTM融合蛋白

 

SNAP-tagTM技術原理

通過SNAP-tagTM(下圖所示土黃色)與底物——苯甲基鳥嘌呤的特異性作用實現標記過程。SNAP-tagTM所帶的活性巰基位點接受了苯甲基鳥嘌呤所攜帶的側鏈苯甲基基團,釋放出了鳥嘌呤。這種新型硫醚鍵共價結合使SNAP-tagTM所攜帶的目標蛋白(圖3所示藍色)間接攜帶上了苯甲基基團所帶的標記物(下圖所示綠色)。

 

SNAP-tagTM技術原理

 

本期小艾給大家帶來了艾美捷代理品牌,細胞骨架領域領航者Cytoskeleton開發的全光譜的SNAP-tag™* 底物——SiR 和 SPY™ 標記的苯甲基鳥嘌呤 (BG) ?。

 

這些BG 衍生物的光譜集中在橙色和遠紅色之間,BG 衍生物帶有熒光標記,細胞滲透性高,非常適合傳統顯微鏡和超分辨率顯微鏡。

 

BG 衍生物的光譜

 

除了標記細胞表面,SNAP-tag 標記還可以標記細胞內部結構或蛋白質,包括細胞核、內質網、高爾基體;然而,這需要用細胞滲透性底物,?我們的SiR和SPY™熒光是細胞滲透性的,可以標記亞細胞結構,甚至是線粒體嵴內部的蛋白質,同時SiR和SPY™熒光可以與 STED 和 SIM等超分辨率成像顯微鏡兼容,進一步增強了SiR和SPY™熒光的實用性,尤其是在分析蛋白質時空動力學時,一旦細胞穩定表達融合 SNAP 標簽,就可以被我們的BG 衍生物標記上了。

SNAP-tag 標記

 

產品推薦:

產品名稱 貨號 檢測通道
SPY555-BG CY-SC204 Cy3或者TMR
SPY620-BG CY-SC404 Texas Red-X
SiR650-BG CY-SC504 Cy5
SiR700-BG CY-SC604 Cy5

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