病毒RNA m6A甲基化研究丨定量檢測、酶活性分析、抗體全方案

 

上周我們向大家介紹了病毒RNA用于m6A甲基化研究的樣本的提取和純化方法,這周將為大家帶來m6A甲基化研究相關的產品。

 

上周給大家說了病毒RNA的提取和純化,如果大家的樣本是細胞或者組織,就參考流程圖的右邊部分。關于組織和細胞的m6A甲基化研究大家應該都很清楚,那么病毒RNA m6A研究有什么不同呢?

 

病毒RNA m6A甲基化研究流程

 

上面這個流程算是總結版本的。一般我們研究m6A逃不過三大方面:m6A RNA的定量; m6A 甲基轉移酶去甲基化酶活性分析;m6A RNA富集、RNA特異性甲基化分析和文庫建立。

 

  1. 病毒RNA m6A定量檢測

RNA甲基化是一種可逆的翻譯后修飾,對大量的生物過程產生表觀遺傳學影響,這些都可以發生在病毒和非病毒衍生的RNA中。其中最常見的是m6A甲基化,占所有RNA甲基化的80%以上,其次是5-mC甲基化,它可以發生在各種RNA分子中。如果您的研究打算研究RNA中m6A或5-mC的全球甲基化水平,我們推薦的比色法和熒光法試劑盒可以幫助提供快速、準確的總體水平定量。然而,也必須知道,如果使用病毒起始材料,這個過程會略有變化。如果是這種情況,您需要確??梢蕴岣咚a生的總RNA的產量,因為從病毒起始材料收集的低量往往太低,無法用于下游。 我們建議參考我們最近的公告文章的各種方法的病毒純化的想法(有需要的小伙伴可聯系小艾喲),如何確??俁NA的質量,在您的實驗流程的后期使用。

貨號 產品名稱 產品描述
cat# P-9005 EpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit (Colorimetric) 在3h 45min內對RNA中的N6-甲基腺苷(m6A或6mA)進行比色定量。
cat# P-9008 EpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit (Fluorometric) 在3h 45min分鐘內熒光定量RNA中的N6-甲基腺苷(m6A或6mA)
cat# P-9015 MethylFlash Urine N6-methyladenosine (m6A) Quantification Kit (Colorimetric) 使用抑制性競爭性ELISA在4小時內對尿液中的m6A進行比色定量。

 

  1. m6A 甲基轉移酶和去甲基化酶活性分析

如果您計劃研究RNA甲基化酶或去甲基化酶的活性/抑制,我們建議使用我們強大的核提取試劑盒,它速度快,確保分離后酶活性保持不變。一旦收集到核提取液,就可以進入有助于測量甲基化酶或去甲基化酶活性/抑制的檢測。我們的比色ELISA試劑盒允許對提取的核樣品進行高通量或手動通量分析,并進行了優化,以確保背景信號保持在較低水平,因此測量是準確和可靠的。

貨號 產品名稱 產品描述
cat# P-9013 Epigenase m6A Demethylase Activity/Inhibition Assay Kit (Colorimetric) 基于ELISA的5小時內FTO、ALKBH5等活性/抑制的定量分析。
cat# P-9019 Epigenase m6A Methylase Activity/Inhibition Assay Kit (Colorimetric) 基于酶聯免疫吸附法的METTL3、METTL14等在5小時內對多種物種的活性/抑制性進行定量。

 

  1. m6A RNA富集和文庫建立

一旦工作流程中的其他步驟完成,一項研究可能最終會尋求富集基因組中存在m6A的部分,并通過構建文庫為下一代測序準備這些片段。我們下面列出的檢測試劑盒都允許富集m6A RNA,而EpiNext CUT&RUN RNA m6A-Seq試劑盒為同時構建文庫提供了額外的功能。

貨號 產品名稱 產品描述
cat# P-9018 EpiQuik CUT&RUN m6A RNA Enrichment Kit 基于CUT&RUN的MeRIP,增加特異性和信號。
cat# P-9016 EpiNext CUT&RUN RNA m6A-Seq Kit 基于CUT&RUN的一體化MeRIP和NGS文庫制備。

 

  1. m6A RNA抗體

如前所述,m6A是最豐富的mRNA修飾,因此,通常是研究表觀遺傳RNA修飾的研究人員感興趣的主題。此類研究通常包含單克隆抗體和多克隆抗體,以驗證結果并幫助了解一旦宿主感染后這種特定修飾如何影響病毒的發展和疾病的影響。 我們的抗體已在所有列出的應用中得到驗證,并為希望在大批量購買之前嘗試嘗試想法的實驗室提供試驗規模。

貨號 產品名稱 產品描述
cat# A-1801 N6-methyladenosine (m6A) Polyclonal Antibody 經過驗證的應用。DB、ELISA、ICC、IP、MeRIP、核苷酸陣列。
cat#A-1802 N6-methyladenosine (m6A) Monoclonal Antibody [2H6] 經過驗證的應用。DB, ELISA, IF, IP, MeRIP, 核苷酸陣列。

 

看到上面這兩種抗體的應用很多,基本涵蓋我們實驗可能應用到的實驗類型,但是呢有個非常常見的應用卻沒有,沒錯,就是WB。很多小伙伴問我們的這個抗體可以做WB不?每次都很遺憾的說不可以。但是,現在我們有了可以做WB的m6A抗體?。?!為了彌補小伙伴們的遺憾,我們最近簽約代理了一個新的品牌——Synaptic Systems(SySy),SySy是德國著名的品牌,專注于研發和生產針對突觸和神經科學相關抗體,以及用于細胞生物學、組織病理學和高分辨率顯微鏡的各種抗體,他們的抗體被諸多高分文章引用,產品獨特且專業。他們的家的m6A抗體信息如下:

 

貨號 產品名稱 產品應用/適用物種 品牌
cat# 202-003 m6A - 202 003 WB / IP / ICC / IHC-P / ELISA
人 / 大鼠 / 小鼠 / 真核生物 / 原核生物
Synaptic Systems
cat#202-011 m6A - 202 011 WB
人 / 大鼠 / 小鼠 / 真核生物 / 原核生物
Synaptic Systems
cat# 202-111 m6A - 202 111 WB / IP / ELISA
人 / 大鼠 / 小鼠 / 真核生物 / 原核生物
Synaptic Systems
這三個產品的參考文獻也非常多喲,各位小伙伴想要了解的可咨詢小艾喲!

 

最后的最后,總結一下病毒RNA m6A研究流程與普通的組織和細胞樣本的區別:其實沒啥區別,用的試劑盒基本都一樣,方法也是一樣的,但是區別在哪呢?就是病毒RNA的量和純度問題,這個會影響整個實驗流程,所以為了更好地完成實驗課題,各位小伙伴要制備好的病毒RNA樣本哦!

 

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作為一家具有高端的技術實力、先進的經營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業,總部位于武漢光谷高新技術開發區,服務面向全國。艾美捷科技是集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術服務與合約開發為一體的專業化高科技公司,為用戶提供專業的前沿資訊、完備的產品、整合的解決方案,及優質的物流服務。為了更好的服務客戶,公司組建了一支經驗豐富的研發團隊-艾美捷生物技術中心,進入研發生產階段,將更優質的產品推薦給國內生物領域的同仁們!

 

艾美捷科技與國內外優秀的生物試劑供應商優保持著密切的合作關系,目前已成為眾多國際知名品牌的中國總代理或一級代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abbexa、Abnova、Agrisera、Anogen、Biosensis、Biovision、Caisson Labs、開曼生物、Cell Biolabs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Demeditec、Epigentek、Equitech-Bio、EXBio、GeneCopoeia、Hycult Biotech、ImmunoReagents、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、Mabtech、Matreya、Norgen Biotek、Origene、ProImmune、ProSpec、ScyTek、Solis BioDyne、SouthernBiotech、StressMarq、Synaptic Systems(SySy)、US Biological等,可以在短時間內為用戶提供專業的前沿資訊、完備的產品及物流服務。

 

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