PCR技術攻略了解一下

 

PCR,即聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR),是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術。說起PCR的擴增原理,想必大家都知道,這里小編也不再贅述。PCR說容易也容易,說難也難,可怕的不是P不出來,而是P不出來還找不到原因,想到曾經無數個為此焦心的日夜,小編的心到現在還為之顫抖~

 

PCR的時候,你是否還在費心的準備冰盒,是否還在擔憂會否因為室溫太高導致酶活降低甚至失效,今天小編為大家mark一家專門且只提供PCR相關試劑的供應商——Solis BioDyne,為你解開這些煩憂。Solis BioDyne運用獨特的蛋白質穩定技術,確保其PCR試劑具有極高的穩定性,即便是在室溫條件下放置1個月,酶活也絲毫不受影響,而且不管你做的是哪種PCR技術,Solis BioDyne都能滿足你的需求。

 

 

顧名思義既是對PCR擴增反應的終產物進行定性及定量分析,因為其在反應過程中無法監測反應進行情況,只有反應完成后通過跑膠得到結果,也稱常規PCR。通常在常規PCR反應中,反應體系各成分是一次性加入并進入循環,極易發生引物錯配和二聚體的形成,繼而導致非特異性產物的擴增。而升級后的熱啟動PCR技術可以有效地解決這一問題,熱啟動通過各種物理化學方法控制PCR的必須成分,通常是DNA聚合酶,直到反應混合物被加熱到可以阻止非特異性引導和引物聚合的溫度后,再啟動PCR來達到有效擴增特異性PCR產物的目的。

 

終點PCR

名稱 貨號 規格
常規PCR酶及Mix FIREPol (regular DNA Polymerase) 01-01-0000S 100U
FIREPol 5x Master Mix 12.5 mM 04-11-00S25 25rxn/20ul
FIREPol 5x Master Mix 12.5 mM ready to load 04-12-00S25 25rxn/20ul
熱啟動PCR酶及Mix HOT FIREPol (HOT Start DNA Polymerase) 01-02-0000S 100U
5x HOT FIREPol GC Master Mix 04-33-00S15 25rxn/20ul
*針對高GC含量
5x HOT FIREPol MultiPlex Mix with 10 mM MgCl2 RTL 04-36-00S20 25rxn/20ul
*多重PCR
5x HOT FIREPol Blend Master Mix RTL 12.5 mM with BSA 04-25-00S25 25rxn/20ul
*含有校正酶,具有高保真性

 

 

通過對PCR擴增反應中的每一個循環產物熒光信號的實時監測從而實現對其實模板的定性及定量分析。目前它主要通過兩種方式——熒光染料或者熒光標記的探針對PCR產物進行標記跟蹤,實時在線監控反應過程,并結合相應的軟件對產物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度。

 

熒光染料:在傳統PCR反應體系中,加入過量熒光染料,該染料只與雙鏈DNA小溝結合的染料,并不與單鏈DNA鏈結合,而且在游離狀態不發出熒光,只有摻入DNA雙鏈中才可以發光,因此,在PCR體系中,隨著特異性PCR產物的指數擴增,每個循環的延伸階段,染料摻入雙鏈DNA中,其熒光信號強度與PCR產物的數量呈正相關。下圖以SYBR Green I染料為例:

 

SYBR Green I染料

 

探針法:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。再通過實時監測整個PCR進程熒光信號的積累,與標準曲線對比進行定量分析。下圖以TaqMan探針為例:

 

TaqMan探針

 

  • 反轉錄PCR(Reverse TranscriptionPCR, RT-PCR

 

RT-PCR是一種將cDNA合成與PCR技術結合分析基因表達的快速靈敏的方法,主要用于對表達信息進行檢測或定量分析。在實際應用中,RT—PCR又常常分為一步法RT-PCR和兩步法RT-PCR。

 

反轉錄PCR

 

類型 名稱 貨號 規格
單鏈cDNA合成 FIREScript RT cDNA synth. Kit sample with RiboGrip 06-15-0000S 20rnx/20 μl
SOLIScript RT cDNA synthesis KIT 06-35-0000S 20rnx/20 μl
RT-qPCR一步法盒子 SOLIScript 1-step Probe Kit 08-57-0000S 50/20 μl
SOLIScript 1-step Multiplex Probe Kit 08-55-0000S 50/20 μl
*多重qPCR

 

Solis BioDyne來源于歐盟-愛沙尼亞共和國,自1995年以來,Solis BioDyne一直致力于開發和生產高品質的生命科學試劑,現已成為當今歐洲領先的試劑供應商之一。高標準的生產標準和服務使Solis BioDyne成為全球值得信賴的首選PCR供應商。我們的DNA聚合酶,PCR Master Mixes,qPCR Mixes和其它試劑被全球110多個國家的研究者所使用,包括頂級研究機構和生物技術公司。

 

艾美捷科技與國內外優秀的生物試劑供應商保持著密切的合作關系,目前已成為眾多國際知名品牌的中國總代理或一級代理,主要包括:Abbkine、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Alomone Labs、Biovision、Biosensis、開曼生物、Caisson Labs、Cytoskeleton、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、PhytoAB、Norgen Biotek、Mabtech、iRegene、StressMarq、Trevigen、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等,可以在第一時間為用戶提供最前沿的專業資訊、完備的產品及物流服務。

 

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