mRNA質量控制:易于檢測dsRNA雜質

雙鏈RNA(dsRNA)是通過體外轉錄產生的治療性mRNA的主要雜質。需要在mRNA生產批次中嚴格監測該轉錄副產物的雜質水平,以確保有效的mRNA表達并降低不期望的高免疫原性風險。

使用SCICONS使用平行運行的dsRNA對照,可估計dsRNA雜質的量

使用SCICONS使用平行運行的dsRNA對照,可估計dsRNA雜質的量

圖1:使用SCICONS

A)將等量(1 μg)的Poly(A)ssRNA(陰性對照)和dsRNA 142 bp(陽性對照)沿著與dsRNA 142 bpbp的4倍稀釋系列一起進行印跡,隨后用SCICONS

B)使用SCICONS通過變性瓊脂糖凝膠電泳確認mRNA完整性。

ARCA:抗反向帽類似物,MT:甲基轉移酶,AnP:南極磷酸酶,NTA:假尿苷,Me 1 NTA:N1-甲基假尿苷,5 moU:5-甲氧基尿苷,5 meC:5-甲基胞苷。

 

雙鏈RNA檢測

雙鏈(ds)RNA形成是病毒感染的標志,其對于誘導先天免疫是必不可少的。dsRNA也參與基因沉默,并在基于體外轉錄的RNA合成期間作為副產物產生??筪sRNA單克隆抗體是檢測細胞培養組織(如FFPE樣品)以及體外轉錄(m)RNA制備物中dsRNA的有效工具。

  • 用于表征檢測具有dsRNA基因組或中間體的病毒(包括SARS、丙型肝炎、登革熱或西尼羅河病毒)。
  • 作為確定未知病原體是病毒還是細菌來源的診斷工具。
  • 用于體外轉錄(m)RNA制備的質量控制。

可用dsRNA檢測產品概述

SCICONS小鼠dsRNA ELISA試劑盒(基于J2)和(基于K1)可根據要求提供。
產品 描述 選擇指南
抗dsRNA單克隆抗體J2 小鼠,IgG2a,κ輕鏈 dsRNA檢測的金標準
推薦用于體外轉錄(m)RNA的質量控制
抗dsRNA單克隆抗體J5 小鼠,IgG2b,κ輕鏈 具有相似親和力和特異性的J2的同位素替代物。
推薦用于在免疫熒光顯微鏡中同時檢測dsRNA和其他標記物
抗dsRNA單克隆抗體K1 小鼠,IgG2a,κ輕鏈 推薦用于Poly I:C檢測
J2交叉反應情況下的替代品
抗dsRNA比較集 J2、J5和K1抗體大小的樣本 推薦用于J2、J5和K1抗體的比較試驗
抗dsRNA單克隆抗體K2 小鼠,IgM,κ輕鏈 J2 K1的替代同種型&
推薦用于(夾心-)ELISA
dsRNA 142 bp 合成dsRNA 抗dsRNA單克隆抗體J2、K1和K2的陽性對照

 

References:
[1] Kariko?et al.?(2005) Suppression of RNA Recognition by Toll-like Receptors: The Impact of Nucleoside Modification and the Evolutionary Origin of RNA.?Immunity?23 (2):165.

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