Cyto 3D ? Live-Dead檢測試劑盒有助于鑒定MiRNA作為膠質瘤預后的有希望的生物標志物

已發現三種微小RNA與神經膠質瘤患者的不良預后相關。使用Cyto 3D ? Live-Dead檢測試劑盒進行的檢測證實了這些miRNA與細胞活力之間的聯系。這些RNA有可能用作腦癌的強大非侵入性生物標志物。

尋找具有預后潛力的指示癌癥基因型的強大生物標志物正在積極進行中。很少有癌癥需要像膠質瘤這樣的生物標志物,膠質瘤是一種難以切除治療的腦腫瘤,通常會導致不良結果。避免活檢作為神經膠質瘤的診斷和預后工具是特別重要的。血液或其他液體組織中的循環分子將是更好的選擇。最近有一些證據表明,微RNA在這方面是有用的,因為與其他大分子相比,它們穿過血腦屏障的能力有所提高。但是,單個miRNA種類本身并不能提供腫瘤狀態的全面視圖,腫瘤狀態可能是異質的,并隨著時間的推移發生劇烈變化。

這篇論文的作者是一個由意大利腫瘤學家和分子生物學家組成的聯盟,他們詳細研究了microRNA(miRNA)譜(如果足夠廣泛)是否與神經膠質瘤的關鍵預后因素相關。研究小組使用RT-PCR方法,從37名膠質瘤患者的血液樣本中獲得了隨時間變化的全面miRNA表達水平。采用液滴數字PCR,其中可以獲得每個miRNA種類數量的準確測量,并相互比較,并與其他基因座的表達水平進行比較,特別是已知對膠質瘤表型有影響的基因,例如異檸檬酸脫氫酶(IDH)代謝領域中的基因。然后,研究小組將某些miRNA種類的表達水平與從培養中生長的膠質瘤細胞系中獲得的表達水平進行了比較,也可以測定細胞生長和存活趨勢。

在詳盡分析PCR數據后,作者發現了一組三種miRNA種類,它們在膠質瘤患者中明確下調,同時與IDH基因的突變狀態密切相關。這些miRNAs,miR-1- 3 p,miR-26 a-1- 3 p和miR-487 b-3 p,在神經膠質瘤患者的血液中以較低的水平被發現,而在IDH相關基因座突變的細胞系中以較高的水平被發現。這三種RNA的存在也與人類患者更好的總生存率和無進展生存率相關。使用TheWell Bioscience的Cyto 3D ? Live-Dead檢測試劑盒,研究人員可以證明培養細胞系的存活率隨著這三種miRNA中每一種的表達水平而下降-特別是在所有三種miRNA一起的情況下-上升。

這篇論文的結論是,這三種miRNA可能是神經膠質瘤腫瘤狀態的有用生物標志物,無論是作為獨立的基于血清的樣本,還是與其他生物標志物和/或活檢聯合使用。通過計算機模擬分析,miR-1- 3 p、miR-26 a-1- 3 p miRNA似乎與涉及細胞侵襲表型的三種蛋白的功能相關,即TKS 4、TKS 5(均為具有酪氨酸激酶底物的支架蛋白)和EFHD 2(涉及細胞遷移的鈣離子結合蛋白)。這些推定的生物標志物的鑒定為腫瘤學家提供了一種潛在的快速和非侵入性的手段,用于跟蹤膠質瘤狀態,可以重復進行,以更全面地了解這種致命癌癥的進展。

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Cyto 3D ?活-死檢測試劑盒用于通過使用快速一步染色程序在雙熒光系統上進行分析來確定活/死有核細胞。該試劑盒推薦用于3D、2D涂層和單層培養的細胞/類器官的活力分析。

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吖啶橙子(AO)和碘化丙啶(PI)均為核染色(核酸結合)染料,用于本試劑盒。AO對活細胞和死細胞都是可滲透的,并將所有有核細胞染色以產生綠色熒光。PI僅穿透具有受損膜的有核細胞的膜,并將死細胞染色以產生紅色熒光。由于淬滅,當細胞用AO和PI染色時,所有活的有核細胞發綠色熒光,所有死的有核細胞發紅色熒光(PI通過熒光共振能量轉移(FRET)降低AO的熒光強度)。無核物質,如紅細胞,血小板和碎片不發熒光,被熒光顯微鏡忽略。

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