Cell Biolabs:QuickTiter™慢病毒滴度試劑盒(慢病毒相關HIV p24)

介紹

HIV-1(人類免疫缺陷病毒-1)是一種病毒,屬于逆轉錄病毒家族。它是導致艾滋病的主要病原體之一。HIV-1感染會攻擊人體的免疫系統,特別是CD4+ T淋巴細胞,削弱機體對各種感染和疾病的抵抗力。隨著疾病的進展,免疫系統逐漸受損,最終導致艾滋病的發展和并發癥的出現。

基于人類免疫缺陷病毒-1(HIV-1)的慢病毒載體已成為基因轉移研究中具有潛力的載體。慢病毒載體的優勢特點是能夠將基因轉移和整合到有分裂和無分裂能力的細胞中。假型包膜與溶瘤性口炎病毒包膜G(VSV-G)蛋白結合,擴大了目標細胞范圍。已經證明,慢病毒載體能夠將基因遞送到神經元、淋巴細胞和巨噬細胞等細胞類型,而此前的逆轉錄病毒載體無法使用。慢病毒載體在體內也被證明能夠有效遞導腦、肝臟、肌肉和視網膜,而不引起毒性或免疫反應。最近,慢病毒系統被廣泛應用于在體外和體內高效地將siRNA整合到各種細胞系和原代細胞中。

 

背景

慢病毒顆粒是通過293T細胞的瞬時轉染3或4個編碼病毒組分的質粒制備的。在48-72小時內收集包裝細胞產生的病毒培養基中的病毒顆粒。為了確保假病毒培養基是活性的,并控制每個目標細胞中整合的病毒構建物的拷貝數,需要在進行遞導實驗之前確定病毒滴度。病毒滴度可以通過對HT-1080或Hela細胞進行遞導,然后進行穩定克隆的抗生素篩選來確定。然而,生成可觀察的穩定細胞克隆以進行計數和計算滴度結果需要幾周的時間。

HIV p24 ELISA也已被用于測定慢病毒樣品的滴度,但它能檢測到在瞬時轉染過程中由293T細胞產生的慢病毒相關p24和游離p24。因此,總p24水平(慢病毒p24和游離p24)不能用于精確確定慢病毒上清樣品中的病毒顆粒。為了精準便捷的進行慢病毒檢測,Cell Biolabs研發了QuickTiter™慢病毒滴度試劑盒(慢病毒相關HIV p24),為病毒上清和純化病毒的快速滴度定量提供了高效的系統。

產品名稱 貨號 規格 說明
QuickTiter™ Lentivirus Titer Kit
(Lentivirus-Associated HIV p24)
VPK-107 96 assay 精準便捷的進行慢病毒檢測

 

原理:

Cell Biolabs的QuickTiter™慢病毒滴度試劑盒(慢病毒相關HIV p24)是一種酶免疫測定方法,用于檢測和定量慢病毒相關的HIV-1 p24核心蛋白(見下面的測定原理)。在與ViraBind™慢病毒試劑(專利技術)形成復合物時,游離p24保留在上清中,慢病毒相關的p24的數量通過HIV p24 ELISA測量。該試劑盒的檢測靈敏度限制為1 ng/mL HIV p24,或約10,000到100,000 TU/mL VSVG假型包膜慢病毒樣品。每個試劑盒提供足夠的試劑進行高達96次的測定,包括標準曲線和慢病毒樣品。

結果示例:

以下圖表展示了典型的QuickTiter™ 慢病毒滴度試劑盒(慢病毒相關的HIV p24)結果。這些數據僅供參考,不應用于解讀實際結果。

圖1:HIV p24 ELISA標準曲線

 

圖2:游離p24不與ViraBind™形成復合物。將在培養基中稀釋的重組p24與ViraBind™慢病毒試劑處理。通過p24 ELISA測量上清液和沉淀中的p24含量,具體步驟請參考實驗步驟。

 

圖3:GFP慢病毒上清的病毒相關p24滴度。將GFP慢病毒構建物與包裝混合物共轉染到293LTV細胞中(目錄號:LTV-100)。轉染后48小時收集培養上清液。HEK293細胞感染GFP慢病毒樣品3天后顯示GFP表達(A:GFP慢病毒上清液;B:ViraBind™沉淀物)。通過ViraBind™慢病毒試劑分離游離p24和病毒相關p24。p24水平的測定方法請參考實驗說明。

 

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Cell Biolabs公司位于美國加利福尼亞州南部重要的工業城市圣迭戈(San Diego),是有名的細胞學試劑品牌,作為前沿的細胞學分析檢測試劑盒生產商,為生物技術和研究類客戶提供最好的基于細胞功能研究以及疾病等方面的高端產品和技術服務。產品主要涵蓋細胞研究、細胞信號通路和蛋白質生物學、代謝研究、病原體和毒素、干細胞研究等領域。全球眾多大學、政府研究機構、生物、制藥企業的科研實驗室均在使用Cell Biolabs的產品。

 

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