WB干貨|IPKine™二抗–完美避免IP-WB實驗重鏈或輕鏈干擾!

 

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。

 

原理:當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在Argarose Beads上的蛋白質A的抗體免疫沉淀A蛋白,那么與A蛋白在體內結合的蛋白質B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離,對B蛋白進行檢測,進而證明兩者間的相互作用。

 

這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的,符合體內實際情況,得到的結果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內結合;也可用于確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。

 

免疫共沉淀原理

(圖片來源于網絡)

 

常見問題:在免疫沉淀實驗后的WB驗證環節中,當使用常規的 Anti-IgG (H+L) 酶標二抗時,通常會出現對應免疫沉淀一抗的重鏈(50 kDa)和輕鏈(25 kDa)的兩條帶。如果檢測的目的蛋白分子量在50 kDa或者25 kDa附近時,就會受到這兩條帶的干擾。

 

一般解決辦法:選擇不同種屬來源的一抗分別進行IP和WB實驗,然后再選擇無種屬交叉反應的二抗進行WB實驗;這種方案相對來說比較昂貴,需要買兩個一抗和兩個對應的二抗。

 

Abbkine解決方案:產生此問題的重點在于實驗中目的蛋白的信號模糊,無法進行判斷,那就需要在根本上將干擾的信號降到最低,而IPKine系列二抗經過特別設計和優化,可以和重/輕鏈特異性結合從而明顯看到目的蛋白信號。如果目的條帶在55kDa左右,可以通過選擇與輕鏈特異性結合的二抗,來消除重鏈條帶對目的蛋白檢測的干擾。如下圖:

 

IPKine系列二抗

 

IPKine是一系列新型的二抗產品,能有效解決IP-WB后的輕/重鏈干擾問題。IPKine系列二抗經過特別優化,不會與IgG的輕/重鏈分子結合,只識別IgG分子的重/輕鏈部分,從而能有效解決IP實驗后的WB檢測中面臨的輕/重鏈干擾信號降到最低。

 

另外,IPKine系列二抗經過特別優化,其針對目的種屬的特異性非常高,同時針對其他非目的種屬的抗體分子的非特異性結合降到最低,從而有效避免了二抗與樣本內免疫球蛋白分子的非特異性雜交,提高實驗的特異性和信噪比。

 

本產品使用簡單,只需將IPKine系列二抗替代傳統的二抗使用即可。無需添加其他額外步驟或者試劑。最終讓您得到最干凈、最清晰的目的條帶。

 

IPKine系列二抗

 

IPKine Mouse Anti-Rabbit IgG LCS 輕鏈特異性二抗檢測NUP50蛋白的IP結果,完美解決重鏈干擾問題!

 

Abbkine?相關產品信息:

產品名稱 特異性 貨號 規格
IPKine™ HRP Goat Anti-Mouse IgG LCS Light chain specific
(輕鏈特異性)
A25012 100/500 ul
IPKine™ HRP Mouse Anti-Rabbit IgG LCS A25022 100/500 ul
IPKine™ HRP Goat Anti-Mouse IgG HCS Heavy chain specific
(重鏈特異性)
A25112 100/500 ul
IPKine™ HRP Goat Anti-Rabbit IgG HCS A25222 100/500 ul

 

IPKine™ 特點與優勢:

1,小包裝即用型試劑,極具性價比;

2,更干凈的背景,更清晰的條帶,卓越的信噪比;

3,完美避免抗體重鏈或者輕鏈的干擾問題;

4,使用簡便,無需額外的試劑和操作步驟;

5,經特殊優化,與其它種屬的IgG分子的交叉反應極低。

 

Abbkine專注于蛋白學和細胞學領域,致力于創新和研發各類抗體、蛋白質、分析試劑與試劑盒,以期成為生命科學研究發展、藥物研發等領域的關鍵推動者。我們為您提供蛋白和免疫研究用戶最喜愛的產品,從免疫學基礎產品,如蛋白提取定量,到免疫學實驗的內參標簽抗體、一抗及二抗等;細胞研究用戶最喜愛的產品,從用于檢測細胞狀態的染料及試劑盒,細胞器提取試劑盒,細胞亞結構染色示蹤及細胞代謝檢測產品,到用于細胞培養的細胞因子及蛋白類檢測試劑盒,只為助力您的研究事業!

 

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