Z大永生化細胞庫,就在ABM&艾美捷–細胞永生化基礎指南(Immortalized Cells) 500+

您可能聽說過這樣的說法:“所有美好的事物終將結束”——尤其是在珍貴的原代細胞培養物在幾次傳代后達到衰老狀態時。然而,得益于永生化細胞系的開發,這種情況已不再如此!在本文中,我們將介紹:

1.?什么是永生化細胞 2.?生成永生化細胞的策略
3.?永生化工作流程概述 4.?細胞系質量控制考慮

 

一.什么是永生化細胞?

您可能習慣于使用直接從活體組織中提取的細胞,稱為原代細胞。原代細胞的難點在于,每次細胞分裂后,它們的端粒都會縮短,導致細胞進入衰老狀態并停止分裂,僅經過幾個細胞周期。這意味著如果您正在進行長期項目,您將經常需要不斷收獲和重新建立新的原代細胞批次。此外,由于不同的收獲條件,每個細胞批次都是不同的,這使得可重復性成為一個問題!

永生化細胞(也稱為連續細胞或細胞系)是端粒和/或腫瘤抑制基因已經被改變的原代細胞。腫瘤抑制基因(例如p53和Rb)對于在DNA損傷的可能性更高時(即在多個細胞周期后,更多關于細胞周期的信息請訪問我們的知識庫)向細胞發出停止分裂的信號非常重要。在永生化細胞的情況下,這些基因已經被抑制或其功能被抑制,使細胞能夠無限期地繼續分裂。

圖1 -端粒是DNA的重復區域,形成染色體末端的保護“帽”,保護染色體免受退化。經過每一輪細胞周期,這些端粒會變短,最終導致細胞進入衰老階段,細胞停止分裂。

 

理想的永生化細胞具有與其親本組織相似的基因型和表型。一些實驗室使用相同的永生化細胞數十年,因此,它們的細胞系已經被很好地表征,并為其長期項目提供了一致的基線。最古老和最常用的人類細胞系是HeLa細胞系,該細胞系是在20世紀50年代從宮頸癌細胞中建立的!但是,正如您將在本文的質量控制部分看到的,檢查細胞系的身份以確保您的細胞系是您認為的那樣是非常重要的。

優點 缺點
原代細胞 與親本組織有相似的染色體數量
具有親本組織的專門生化特性(生長因子和激素分泌)
是體內情況的最佳實驗模型
有限的壽命/有限的細胞分裂次數
種群之間和不同制備之間的相當大的變異
在培養中維持起來非常困難(非?!疤籼蕖保哺菀资艿轿廴?br /> 難以獲得(供體可用性)
永生化
細胞
傾向于比原代細胞更快地生長,并且可以生長到更高的細胞密度
細胞類型統一(大多數是克隆的)
相同的供體來源,因此批次間變化較小
大多數細胞特性從親代細胞中得以保留
為長期項目節省了金錢和時間
適用于體外實驗
細胞在體外培養過程中可能隨時間分化
體外的細胞行為可能不代表體內情況
表型或細胞功能可能發生改變

 

二.細胞永生化策略

那么,您如何工程化一個永生化細胞系呢?有兩種主要方法:

方法A:端粒酶逆轉錄酶蛋白(TERT)表達

TERT蛋白是端粒酶的催化亞基,在大多數體細胞中通常不活躍。在這種方法中,您可以將編碼人類端粒酶逆轉錄酶(hTERT)蛋白的cDNA插入到您感興趣的原代細胞中。當hTERT被外源性表達時,細胞能夠維持足夠的端粒長度以避免衰老。這是最近開發用于細胞永生化的方法。

優點 缺點
對于受端粒長度影響最大的細胞(例如人類細胞)的永生化效果很好
Z不可能引起類似癌癥的表型
使用此方法生成的細胞系具有穩定的基因型并保留關鍵的表型標記
與方法B相比,某些細胞類型的永生化成功率可能不高
hTERT的過度表達甚至可以在某些細胞類型(例如上皮細胞)中誘導細胞死亡
僅使用這種方法可能不足以成功實現永生化

 

方法B:病毒致癌基因

病毒致癌基因,如SV40病毒的大T抗原或HPV的E6/E7致癌基因,可以通過抑制腫瘤抑制基因(例如p53和Rb)來實現永生化。這種方法比方法A更快地生效,但可能會改變一些細胞的特性。

優點 缺點
永生化的最快速途徑
對于難以永生化的原代細胞(例如上皮細胞)很有用
可能會改變細胞的特性(例如失去接觸抑制,基因組不穩定性,細胞周期檢查點的破壞)
僅使用這種方法可能不足以成功實現永生化

 

在許多情況下,單獨使用方法A和B可能不足以成功實現永生化。最近的研究發現,共同表達hTERT和病毒致癌基因具有更高的成功率,并產生更真實和正常的細胞模型,具有明確定義的遺傳背景。

圖2展示了正常細胞的典型壽命(綠色箭頭)。每次分裂,端??s短,直到最終達到所謂的衰老狀態,此時細胞停止復制并死亡。通過過度表達或抑制特定基因(例如破壞p53和RB途徑),我們可以逆轉或抑制端??s短,使細胞繼續分裂而不達到衰老。

試劑 機制 ABM可提供的形式
SV40T Antigen Suppresion of p53 and Rb genes Lentivirus, Adenovirus, Retrovirus
p53 siRNA Knockdown of p53 tumor suppression gene siRNA Lentivirus
Rb siRNA Knockdown of Rb tumor suppression gene siRNA Lentivirus
Ras Suppression of Rb Lentivirus
C-myc T58A Suppression of p53 Lentivirus
Bmi1 Inhibition of p16/Rb pathway Lentivirus
CDK4 Suppression of p16/Rb pathway Lentivirus
HPV 16 E6/E7 Inhibition of p16/Rb pathway Lentivirus
EBV Viral oncogene -
hTERT Elongation of telomeres Lentivirus, Adenovirus, Retrovirus

表1:本表展示了常見的永生化方法。每種機制都涉及破壞圖2中顯示的復制過程中的關鍵基因。右列描述了abm的永生化試劑系列中可用的形式。您可以在我們的知識庫上閱讀有關不同病毒的更多信息。

 

三.永生化工作流程概述

3:基本的細胞系永生化工作流程。

 

細胞系質量控制考慮

太好了!在這個階段,您已經生成了一個永生化細胞系。但是,在您開始在項目中使用您的細胞系之前,有一些重要的質量控制檢查您可以進行,以確保您的細胞系處于完美狀態。

A.您的細胞系表征

每次永生化后,您應該始終檢查您的細胞是否具有適當的標記,以及細胞的功能,以確保它代表您所使用的原代細胞。當您研究細胞途徑時,這一步尤為重要,因為您不希望永生化步驟改變了特定途徑、功能或細胞的表型。

例如,如果您計劃使用您的細胞進行細胞毒性測定,那么使用您的永生化細胞與原代細胞一起進行細胞毒性測定是個好主意,以確保您新永生化的細胞對刺激的反應與它們的原始細胞相似。

B.傳代和轉基因表達測試

將您的細胞傳代至少30次,以證明轉基因已穩定表達,并觀察它們的生長速度已提高,密度能力已增加。

C.STR分析

正如本文開頭提到的,驗證您的細胞系身份至關重要,因為可能會發生交叉污染或種群混合的問題。例如,根據《科學》雜志上發表的一篇論文,廣泛用于實驗室的著名HeLa細胞被發現污染了許多細胞系,包括Hep-2和INT407細胞系。

識別細胞系的黃金標準是短串聯重復(STR)分析。STR分析是一種方法,其中在特定位點的短串聯DNA重復與標準參考配置文件進行比較。細胞系的STR分析可以用來確認其身份,定期進行STR分析是個好主意,以確保您的細胞系沒有隨著時間的推移受到污染。

為了應對細胞系誤識別事件,資助機構如NIH現在要求在資助申請中使用的細胞系進行STR分析,許多期刊也開始鼓勵這個關鍵的質量控制檢查。

D.支原體和病原體檢測

最后,始終測試微生物污染物,如真菌、細菌和支原體是個好主意。特別是支原體,是細胞培養實驗室中最常見的污染物之一。通常很難通過顯微鏡下的視覺檢查來檢測支原體。然而,這種細菌可以影響細胞的增殖,改變其基因表達譜,并可能扭曲您的實驗結果。有許多試劑盒可用,例如abm的PCR支原體檢測和清除試劑盒,可以輕松檢測并清除50多種類型的支原體。

 

我們希望本文能幫助您獲得開始您的第一個細胞永生化項目所需的信心!如果永生化過程聽起來太麻煩了,不用擔心——有許多細胞系庫可用,包括abm的500+永生化細胞系和800+獨特的細胞系,用于藥物發現,全球可用。您可以在這里查看我們的目錄或索取免費的實體副本。沒有看到您正在尋找的特定細胞系,請查看下方表格(部分產品),或者請隨時與abm中國區代理,艾美捷科技聯系!400-6800-868,www.amyjet.com

貨號 永生化細胞 貨號 永生化細胞
T0573 永生化人晶狀體上皮細胞-SV40 T0165 永生化人胰島衍生前體細胞- Ras
T0599 永生化小鼠遠端附著附睪上皮細胞系(DC2) T0265 永生化犬真皮成纖維細胞- SV40
T0038 永生化小鼠Floxed Fam20c成骨細胞 T0295 永生化小鼠雪旺細胞
T9423 永生化子宮內膜基質細胞 SV40T/hTERT T0267 永生化犬真皮成纖維細胞- Myc
T9427 永生化子宮內膜基質細胞 SV40+hTERT T0565 永生化小鼠腸肌成纖維細胞
T0688 永生化小鼠肝星狀細胞 - SV40 T0622 永生化大鼠后腎間充質前體細胞(KMM)
T1074 永生化人卵巢上皮細胞-SV40T T0449 永生化小鼠心肌源性祖細胞
T9040 永生化毛細血管內皮細胞-SV40 T0490 永生化人肺成纖維細胞系
T0598 永生化小鼠近端附睪附睪上皮細胞系(PC1) T0081 永生化胎牛腎細胞- SV40
T3105 BMP報告永生化(BRITER)細胞系 T0503 永生化人類毛囊毛乳頭細胞-SV40T/c-Myc
T0251 永生化人小膠質細胞 - SV40 T0608 永生化卵巢表面上皮細胞
T1013 永生的人二倍體成纖維細胞-Htert T0319 永生化小鼠晚期黑素細胞
T9202 永生化成年大鼠海馬星形膠質細胞sv40 T0749 永生化Bcl-x小鼠胚胎成纖維細胞- SV40T
T9097 永生化大鼠視網膜毛細血管內皮細胞 T0690 永生化小鼠MyD88-/-肝星狀細胞
T0495 永生化小鼠肺上皮細胞(MLE-15) T0623 永生化小鼠系膜細胞- SV40
T0448 永生化豬主動脈內皮細胞(AOC) T3451 Cas9表達永生化人小膠質細胞-SV40細胞系
T9258 永生化小鼠心臟微血管內皮細胞SV40 T0649 永生化小鼠支持細胞
T0446 永生化人心臟成纖維細胞 T0641 永生化小鼠遠端小管KDT3細胞
T0515 永生化人主動脈平滑肌細胞- sv40 T0544 永生化小鼠前脂肪細胞
T0557 永生化人冠狀動脈平滑肌細胞 T0280 永生化人星形膠質細胞-SV40
T0571 永生化人類視網膜細胞 T3971 穩定表達永生化人小膠質細胞SV40細胞系的RFP
T0154 永生化人乳腺成纖維細胞(HMF3S) T0640 永生化小鼠近端小管KPT11細胞
T9415 永生化山羊睪丸細胞- SV40T T0168 永生化人胰腺間充質干細胞
T0026 永生化人牙齦成纖維細胞- hTERT T0504 永生化小鼠野生型主動脈內皮細胞
T9223 永生化腸平滑肌細胞-SV40+hTERT T0235 永生化小鼠嗅球細胞
T0577 永生化人角膜內皮細胞(IHCE) T0355 永生化大鼠胚胎紋狀體野生型(121-1I)細胞
T0501 永生化毛囊真皮乳頭狀細胞-hTERT T0029 永生化人類菌狀味覺細胞——SV40
T0021 永生化人軟骨細胞 - SV40 T0358 永生化大鼠中腦(AF5)細胞系- SV40T (T155g)
T9254 永生化鵝卵巢顆粒細胞 -SV40 T0016 永生化人臍血間充質干細胞
T9249 永生化人發生發基質細胞–SV40 T0344 永生化人新生成纖維細胞
T9250 永生化人發生發基質細胞–HPV T0015 永生化大鼠心肌細胞
T0457 永生化人心肌細胞 - SV40 T0687 永生化犬骨髓間充質干細胞(DS1)
T9400 永生化人腦膜瘤細胞 -SV40+hTERT T0048 永生化小鼠牙根尖乳頭祖細胞
T9403 永生化人腦膜瘤細胞-SV40T T0352 永生化犬間充質干細胞-人乳頭瘤病毒E6/E7
T9265 永生化人正常膀胱平滑肌細胞 (HNBdSMC)-hTERT T9256 永生化人臍靜脈內皮細胞-SV40
T9416 永生化山羊睪丸細胞- SV40 T0248 永生化大鼠蛛網膜細胞- SV40/hTERT
T0764 永生化人子宮內膜異位細胞 (12Z) T0692 永生化大鼠下丘腦細胞(RCHT-1)
T9402 永生化人腦膜瘤細胞- HPV T0304 永生化人類正常皮膚細胞
T9205 永生化小鼠膀胱上皮細胞-SV40T T0017 永生化人臍血間充質干細胞
T9206 永生化小鼠膀胱上皮細胞-SV40+hTERT T0575 永生化大鼠視網膜前體細胞系
T9215 永生化小鼠頸動脈內皮細胞-hTERT T0693 永生化人杜氏肌營養不良癥骨骼肌細胞
T9630 永生化Cas9 Expressing 人心肌細胞 - SV40 Cell Line T0606 穩定表達LH/CG受體的永生化大鼠類固醇生成顆粒細胞
T9440 永生化人子宮內膜基質細胞 SV40T T0757 永生化大鼠胚胎紋狀體(M213-1L)細胞
T0014 永生化人臍靜脈內皮細胞 - SV40 T0605 穩定表達卵泡刺激素受體的永生化大鼠類固醇生成顆粒細胞
T0162 永生化人胰島衍生前體細胞 - SV40 T0009 永生化人椎間盤軟骨終板衍生干細胞-SV40
T9437 永生化人癌相關成纖維細胞-HPV T0023 永生化人軟骨細胞
T9213 永生化大鼠腦微血管內皮細胞-SV40+hTERT T9243 永生化人鼻上皮細胞-SV40
T0259 永生化大鼠腦微血管內皮細胞 - SV40 T0039 永生化小鼠Floxed Fam20c牙乳頭間充質細胞
T0533 永生化人子宮內膜基質細胞(HESC) T3961 穩定表達綠色熒光蛋白的永生化人小膠質細胞SV40細胞系
T0277 永生化小鼠腦內皮細胞 - hTERT T0345 永生化人表皮角質形成細胞
T0675 永生化16三體小鼠神經元細胞 (MTh) T9230 永生化人毛囊內根鞘細胞系
T0491 永生化人肺微血管內皮細胞 T0578 永生化人角膜成纖維細胞(IHCF)化人角膜成纖維細胞(IHCF)
T9210 永生化大鼠腦微血管內皮細胞-hTERT T9241 永生化人前列腺平滑肌細胞-人乳頭瘤病毒
T9214 永生化大鼠腦微血管內皮細胞-HPV16-E6/E7 T9235 永生化人前列腺平滑肌細胞-hTERT
T9212 永生化大鼠腦微血管內皮細胞-SV40T T9234 永生化人毛囊內根鞘細胞系-人乳頭瘤病毒-16 E6/E7
T9219 永生化小鼠頸動脈內皮細胞-HPV T3031 PARP-1敲除永生化小鼠心臟內皮(HYKO6)細胞系
T9216 永生化小鼠頸動脈內皮細胞-SV40 T0904 永生化人皮膚成纖維細胞- HPV E6/E7
T9217 永生化小鼠頸動脈內皮細胞-SV40T T9231 永生化人毛囊內根鞘細胞系-SV40
T9218 永生化小鼠頸動脈內皮細胞-SV40+hTERT T0613 永生化人近端腎小管細胞
T9211 永生化大鼠腦微血管內皮細胞-SV40 T0236 永生化小鼠嗅球細胞(OBC6)
T9227 永生化人小膠質細胞 -SV40+hTERT T9245 永生化人鼻腔上皮細胞-SV40+hTERT
T9221 永生化人腸平滑肌細胞-SV40T T9247 永生化人鼻上皮細胞-人乳頭瘤病毒-16 E6/E7
T9222 永生化人腸平滑肌細胞-HPV16-E6/E7 T9233 永生化人毛囊內根鞘細胞系-SV40+hTERT
T9226 永生化人小膠質細胞-SV40T T0403 永生化小牛甲狀腺細胞-Myc
T0034 永生化人類骨骼肌細胞 T9436 永生上頜竇粘膜間充質干細胞-SV40
T9228 永生化人小膠質細胞-Hpv T9240 永生化人前列腺平滑肌細胞-SV40T
T9220 永生化人小腸平滑肌細胞-SV40 T9237 永生化人前列腺平滑肌細胞-SV40T
T9225 永生化人類小膠質細胞-SV40 T0450 永生化人乳腺上皮細胞
T1015 永生化人肺成纖維細胞 T0767 永生化人牙周膜細胞- hTERT
T0520 永生化人骨髓間充質干細胞SV40 T0237 永生化小鼠嗅球細胞(OBC13)
T0529 永生化人骨髓間充質干細胞 T9252 永生化人成骨細胞(HNOB)-RAS V12
T9305 永生化小鼠細胞系SV40T的永生化下丘腦神經元 T0024 永生化人軟骨細胞- Ras
T0682 永生化人類神經干細胞-Myc T9239 永生化人前列腺平滑肌細胞-SV40+hTERT
T9301 SV40永生化人類乳腺葉狀腫瘤 T0258 永生化小鼠胚胎囊性纖維化成纖維細胞-Ras
T9302 永生化人類乳腺葉狀腫瘤 T9236 永生化人前列腺平滑肌細胞-SV40
T9303 人乳頭瘤病毒永生化人類乳腺葉狀腫瘤 T0290 永生化小鼠腦毛細血管內皮細胞(cEND)
T9304 小鼠永生化下丘腦神經元細胞系-SV40+SV40T T0102 永生小鼠肝竇內皮細胞- SV40
T9433 永生化人胰腺基質細胞-(3359)-hTERT+SV40 T9201 永生化人子宮內膜基質細胞-SV40
T9430 永生化人胰腺基質細胞-(3223)-端粒酶逆轉錄酶+SV40 T0579 永生化人角膜角質形成細胞(IHCK)
T9435 永生化人類癌癥相關成纖維細胞-SV40 T9260 永生豬巨噬細胞(含成纖維細胞)-SV40
T9431 永生化人胰腺基質細胞系(3223)-hTERT+SV40T T0421 永生化人甲狀腺細胞-SV40
T0470 永生化人間皮細胞系-SV40 T9261 永生化豬巨噬細胞(含成纖維細胞)-MYC
T9434 永生化人胰腺基質細胞(3359)-hTERT+SV40T T0528 永生化小鼠樹突狀細胞(MutuDC1940)
T0558 永生化人肺動脈平滑肌細胞 T0447 永生化人主動脈內皮-SV4
T0164 永生化人胰島衍生前體細胞-Myc T0607 永生化小鼠前列腺上皮細胞 (iMPEC)
T0462 永生化人黑素細胞 T0268 永生化犬真皮成纖維細胞- Ras
T0677 永生化MS-/-小鼠肺泡巨噬細胞 T9262 永生化豬巨噬細胞(含成纖維細胞) -HPV
T0486 永生化人支氣管上皮細胞- SV40 T9251 永生化人成骨細胞 (HNOB) -SV40T
T0062 永生化小鼠kupffer細胞 T0281 永生化人星形膠質細胞,胎兒 - hTERT
T0047 永生化小鼠成牙骨質細胞 T9232 永生化人毛囊內根鞘細胞-SV40T
T0068 永生化大鼠門靜脈肌成纖維細胞(RGF) T0523 永生化人骨髓間充質細胞 – hTERT
T0044 永生化人牙周膜成纖維細胞- SV40 T0513 永生化人頭臂動脈內皮細胞 - SV40
T0137 永生化小鼠髓樣來源抑制樣(HD1A)細胞 T0514 永生化人心臟微血管內皮細胞 - SV40
T0163 永生化人胰島衍生前體細胞 T1096 永生化人胎兒腎臟細胞 - E6/E7
T0463 永生化人類黑素細胞-SV40和hTERT T0487 永生化人肺泡細胞
T0570 永生化人結腸細胞 T0510 永生化人頸動脈平滑肌細胞 - SV40
T0227 永生化小鼠顱縫細胞 T9263 永生化幼鴨腸上皮細胞 - SV40
T0129 永生化小鼠胚胎肝祖細胞 T9441 永生化人胰腺成纖維細胞-SV40
T0245 永生化大鼠腸膠質細胞(EGC) T0158 永生化人胰腺細胞–Myc
T0084 永生化馬腎臟細胞 T0276 永生化小鼠腦內皮細胞 -SV40
T0010 永生化小鼠關節軟骨細胞(iMAC) T0019 永生化小鼠顱骨間充質祖細胞(iCALs)
T0133 永生化人類淋巴母細胞-EBV(KMS-15) T9264 永生化小鼠心臟微血管內皮細胞 -SV40+hTERT
T0035 永生的小鼠跟腱細胞(iMAT) T9259 永生化小鼠心臟微血管內皮細胞 HPV
T0082 永生化嬰兒腎上皮細胞系 T0370 永生化大鼠視網膜細胞 (E1A-NR.3)
T0069 永生化大鼠門靜脈肌成纖維細胞(RGF-N2) T0532 永生化人滋養層細胞 - hTERT (Sw.71)
T0466 永生化小鼠黑素細胞 T0720 永生化小鼠真皮乳頭細胞(iDP6)
T0318 永生化小鼠祖細胞樣黑素細胞(iMC23) T0493 永生化人支氣管平滑肌細胞
T0371 永生化人原代小梁網細胞系-SV40 T0456 永生化人間皮細胞 (HPV E6E7)
T0500 永生化毛囊真皮乳頭細胞系-SV40 T9268 永生化人脂肪下皮細胞 (HNSA)-SV40Tt
T0373 永生化小鼠視網膜細胞系(MU-PH1) T0732 永生化人頜下腺細胞
T0530 永生化人胎盤上皮細胞-SV40 T0596 永生化(有條件)大鼠黃體細胞(GG-CL)
T0101 永生化小鼠肝細胞-SV40 T0597 永生化(有條件)大鼠蛻膜細胞(GG-AD)
T0167 永生化人胰腺間充質干細胞-SV40 T0357 永生化大鼠胚胎紋狀體(M26-1F)細胞 SV40T
T0581 永生化人類總肝細胞群 T0691 永生化人髓核細胞 - hTERT
T0320 永生化小鼠中間分化成黑素細胞 T0540 永生化人脂肪來源基質細胞-Bmi-1 / hTERT
T0132 永生化人類淋巴母細胞-EBV(KMS-9) T0729 永生化布朗前脂肪細胞 (PAZ6)
T0170 永生化人胰腺間充質干細胞-Ras T0632 永生化人食管上皮細胞(NE2-hTERT)
T0289 永生化小鼠星形膠質細胞- SV40T(IMA2.1) T0247 永生化小鼠小膠質細胞
T0243 永生化小鼠神經膠質細胞 T0006 永生化人胎兒成骨細胞系 - SV40
T0266 永生化犬真皮成纖維細胞 T9098 永生化大鼠視網膜Muller細胞系-SV40T
T0274 永生化犬真皮成纖維細胞 T9203 永生化小鼠膀胱上皮細胞-hTERT
T0025 永生化人牙齦成纖維細胞-SV40和hTERT T9204 永生化小鼠膀胱上皮細胞-SV40
T0033 永生化人骨骼肌成肌細胞 T9207 永生化大鼠肺微血管內皮細胞-SV40
T0574 永生化小鼠視網膜色素上皮細胞系- HPV16 E6/E7 T9208 永生化大鼠肺微血管內皮細胞-hTERT
T0524 永生化成人骨髓基質細胞- SV40 T9209 永生化大鼠肺微血管內皮細胞-SV40+hTERT
T0286 永生化小鼠施萬細胞 T9405 永生化乳腺葉狀腫瘤細胞-SV40
T9412 永生化乳腺葉狀腫瘤細胞-HPV T9409 永生化乳腺葉狀腫瘤細胞-SV40T

 

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