據介紹，人類FLVCR1和FLVCR2是主要促進因子超家族的成員。它們的功能障礙與多種臨床疾病有關，包括PCARP、HSAN和Fowler綜合征。早先的研究認為，FLVCR1可能具有血紅素輸出功能，而FLVCR2則被認為具有血紅素輸入功能，但對于這兩種轉運體的功能，仍然沒有確鑿的生化和詳細的分子證據。

FLVCR2膽堿轉運的擬議模型

研究人員發現貓白血病病毒C亞群受體相關蛋白1和2（FLVCR1和FLVCR2）通過濃度驅動的底物轉運過程促進膽堿和乙醇胺跨質膜轉運。通過結構和計算分析，研究人員確定了FLVCR不同的構象狀態，并揭示了它們與底物相互作用的配位化學原理。完全保守的色氨酸和酪氨酸殘基構成了這兩種轉運體的結合口袋，并通過陽離子-π相互作用賦予膽堿和乙醇胺選擇性。

這些發現闡明了FLVCR1和FLVCR2轉運膽堿和乙醇胺的機制，提高了人們對干擾這些重要過程的疾病相關突變的理解，并闡明了這些主要促進劑超家族蛋白在轉運循環過程中的構象動態。

文章來源：

Ri, Keiken, Weng, Tsai-Hsuan, Claveras Cabezudo et al,Molecular mechanism of choline and ethanolamine transport in humans.DOI: 10.1038/s41586-024-07444-7,Nature：最新IF：69.504

產品詳情：

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FemtoMax (貨號：FEMTOMAX-020)應用實例展示：

Elisa實驗：

不同組的血漿MDS-OAβ的濃度檢測：將孵育的血漿樣品混合物和連續稀釋的標準樣品加入各自的孔中，并將板在室溫下孵育1小時。然后，加入100μL/孔的增強化學發光底物溶液（p/n Femtomax），并使用Victor 3TM多分光光度計檢測相對發光單元（RLU）信號。PMID: 33958861

Korean version of Consortium to Establish a Registry for Alzheimer’s disease（CERAD-K）和血漿低聚β淀粉樣蛋白（OAβ）的測試：（a） CERAD-K和OAβ濃度的原始分數。（b）與對照組相比，言語流利度、命名、單詞記憶/回憶和總分異常的CERAD組（年齡/性別/教育，調整標準差低于?1.5）的OAβ濃度更高。（c） 高OAβ組（≥0.78 ng/mL）在命名、單詞記憶/回憶/識別和總分方面的異常明顯更常見。PMID: 32326061

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Western Blot實驗：

CK2.3對RANKL誘導的破骨細胞生成中p-Erk1/2的影響：CK2.3在RAW264.7細胞中刺激24小時后增加p-Erk 1/2，如（A）蛋白質印跡所測定的。將印跡在3%BSA中孵育1小時以封閉非特異性結合?？贵w以1:1000稀釋液（在1%BSA中）在4°C下過夜使用。隨后與HRP抗兔二抗以1:5000稀釋液（在1%BSA中）孵育。印跡在化學發光FemtoMax超敏HRP底物（p/n FemtoMax）中孵育2分鐘。PMID:3260129

使用Femtomax的小鼠抗AKT pS473抗體的蛋白質印跡：泳道1：未處理細胞中的非磷酸化AKT。泳道2：PDGF刺激的NIH/3T3細胞裂解物上磷酸化的AKT（用箭頭指示在~56kDa處）。上樣量：每泳道10μg。一抗：AKT pS473抗體，1:10000，TBS，含0.05%?Tween-20和1%BSA，在4°C下1小時。二抗：HRP標記的Gt-a-Mouse IgG（p/n 610-103-121），以1:20000稀釋，在4℃下與化學發光FemtoMax?超敏HRP底物（p/n FemtoMax-100）一起使用1小時。批號：25245AB

抗GST標簽抗體的蛋白質印跡：泳道1：重組GST標記的重組蛋白5μg；泳道2：重組GST-標記的重組蛋白質2μg；泳道3:重組GST標記的重組蛋白1ug。泳道4:重組GST標記的重組蛋白500 ng。泳道5:重組GST標記的重組蛋白250 ng。泳道6:重組GST標記的重組蛋白100 ng。泳道7:重組GST標記的重組蛋白50 ng。一抗:抗gst抗體，1:1000，在4℃下過夜。二抗：驢二抗，1:10000，室溫45分鐘。封閉：5%BLOTTO，4°C過夜。預測/觀測大?。?8 kDa。

使用化學發光FemtoMax?HRP底物進行蛋白質印跡檢測：rPARP1結構域在4°C下使用一抗兔血清1:500過夜曝光3秒后在11 kDa處檢測到。二抗HRP山羊抗兔IgG抗體1:40000。所有孵育均在用于熒光蛋白封閉的封閉緩沖液（p/n MB‐070）中進行。

化學發光FemtoMax?超靈敏HRP底物和競爭對手的比較：GAPDH蛋白以1000、250、62.5、15.6ngs的上樣量點在硝化纖維膜上。將膜在室溫下封閉一小時。一抗：Rb抗GAPDH1:2000稀釋，在4°C下孵育過夜。洗滌后，二抗：Gt抗Rb IgG HRP在室溫下以1:50000稀釋孵育2小時。檢測：化學發光FemtoMax?超敏HRP底物Vs競爭對手1-4。

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FemtoMax (貨號：FEMTOMAX-020)引文展示：

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AntibodySystem Laboratories SAS是一家成立于2019年的法國生物試劑研發品牌，由擁有30多年蛋白抗體開發經驗的專家領導。該品牌專注于生產重組抗體、重組蛋白、生物類似藥物和RUO ELISA試劑盒等產品，旨在為全球生物實驗室提供高質量、經濟實惠的解決方案。AntibodySystem與多個領域的合作伙伴建立了長期穩定的合作關系，其產品線包括流式抗體、功能性抗體、PEG抗體等多種類型，支持科研和藥物開發的精確性和重復性。通過不斷的技術創新和合作，AntibodySystem致力于成為生物試劑領域的創新領導者。

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AntibodySystem產品列表：

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研究人員表示，HIV疫苗開發的一個關鍵障礙是無法在人類體內誘導出B細胞譜系的廣泛中和抗體（bnAb）。在HIV-1感染者中，bnAb需要數年才能形成。HVTN 133臨床試驗研究了一種針對B細胞譜系的HIV-1包膜（Env）膜近端外部區域（MPER）bnAb的肽/脂質體免疫原（NCT03934541）。

研究人員報告了MPER多肽脂質體誘導成熟bnAb及其前體的多克隆HIV-1 B細胞譜系，其中最有效的bnAb能中和15%的全球2級HIV-1毒株和35%的B族毒株，并在第二次免疫后啟動了B細胞譜系。疫苗選擇了不可能發生的突變，增加了抗體與gp41和脂質的結合，從而增強了中和效果。這項研究證明了，快速疫苗誘導具有異源中和活性的人類B細胞譜系和選擇抗體不可能突變的概念，并為成功開發HIV-1疫苗勾勒出了一條道路。

文章來源：

Wilton B. Williams, S. Munir Alam, Gilad Ofek et al,Vaccine induction of heterologous HIV-1-neutralizing antibody B cell lineages in humans.DOI: 10.1016/j.cell.2024.04.033,Cell：最新IF：66.85

據介紹，衰老是一個復雜而不可避免的生物過程，其特征是體內平衡逐漸喪失和器官功能下降。細胞衰老的病理特征，包括細胞周期停滯、代謝紊亂和衰老相關分泌表型（SASP）的出現，共同促成了衰老的復雜性和多面性。除了與p53的經典相互作用外，小鼠雙分鐘基因2（MDM2），傳統上被稱為參與蛋白質降解的E3泛素連接酶，在控制衰老的細胞過程中發揮著關鍵作用。組蛋白去乙?；福℉DAC）是一類主要在細胞核中表達的組蛋白脫酰酶，已成為腎組織衰老的關鍵因素。

研究人員探討了MDM2和HDAC1在腎臟衰老中的相互作用。研究人員在小鼠中建立了一個2年的自然衰老模型，該模型通過SA-β-GAL染色和腎臟中衰老相關標志物如p21、p16和TNF-α的表達增加得到了驗證。

此外，研究人員發現MDM2的表達顯著增加，而HDAC1的表達在腎臟衰老過程中下調。在體外H₂O₂刺激的HK2細胞中證實了這一現象。敲除腎小管MDM2減輕了衰老小鼠的腎臟衰老和H₂O₂刺激的HK2細胞的衰老。

此外，研究人員證明MDM2通過協調HDAC1的泛素化和隨后的降解來促進腎臟衰老。這些機制協同加速了腎組織的衰老過程，突出了MDM2和HDAC1之間復雜的相互作用，支持了與年齡相關的器官功能下降。

文章來源：

Xiang, Hui-ling, Yuan, Qian, Zeng et al, MDM2 accelerated renal senescence via ubiquitination and degradation of HDAC1.DOI: 10.1038/s41401-024-01294-9,《中國藥理學報》最新IF：8.2

一．什么是永生化細胞？

您可能習慣于使用直接從活體組織中提取的細胞，稱為原代細胞。原代細胞的難點在于，每次細胞分裂后，它們的端粒都會縮短，導致細胞進入衰老狀態并停止分裂，僅經過幾個細胞周期。這意味著如果您正在進行長期項目，您將經常需要不斷收獲和重新建立新的原代細胞批次。此外，由于不同的收獲條件，每個細胞批次都是不同的，這使得可重復性成為一個問題！

永生化細胞（也稱為連續細胞或細胞系）是端粒和/或腫瘤抑制基因已經被改變的原代細胞。腫瘤抑制基因（例如p53和Rb）對于在DNA損傷的可能性更高時（即在多個細胞周期后，更多關于細胞周期的信息請訪問我們的知識庫）向細胞發出停止分裂的信號非常重要。在永生化細胞的情況下，這些基因已經被抑制或其功能被抑制，使細胞能夠無限期地繼續分裂。

圖1 -端粒是DNA的重復區域，形成染色體末端的保護“帽”，保護染色體免受退化。經過每一輪細胞周期，這些端粒會變短，最終導致細胞進入衰老階段，細胞停止分裂。

理想的永生化細胞具有與其親本組織相似的基因型和表型。一些實驗室使用相同的永生化細胞數十年，因此，它們的細胞系已經被很好地表征，并為其長期項目提供了一致的基線。最古老和最常用的人類細胞系是HeLa細胞系，該細胞系是在20世紀50年代從宮頸癌細胞中建立的！但是，正如您將在本文的質量控制部分看到的，檢查細胞系的身份以確保您的細胞系是您認為的那樣是非常重要的。

二．細胞永生化策略

那么，您如何工程化一個永生化細胞系呢？有兩種主要方法：

方法A：端粒酶逆轉錄酶蛋白（TERT）表達

TERT蛋白是端粒酶的催化亞基，在大多數體細胞中通常不活躍。在這種方法中，您可以將編碼人類端粒酶逆轉錄酶（hTERT）蛋白的cDNA插入到您感興趣的原代細胞中。當hTERT被外源性表達時，細胞能夠維持足夠的端粒長度以避免衰老。這是最近開發用于細胞永生化的方法。

方法B：病毒致癌基因

病毒致癌基因，如SV40病毒的大T抗原或HPV的E6/E7致癌基因，可以通過抑制腫瘤抑制基因（例如p53和Rb）來實現永生化。這種方法比方法A更快地生效，但可能會改變一些細胞的特性。

在許多情況下，單獨使用方法A和B可能不足以成功實現永生化。最近的研究發現，共同表達hTERT和病毒致癌基因具有更高的成功率，并產生更真實和正常的細胞模型，具有明確定義的遺傳背景。

圖2展示了正常細胞的典型壽命（綠色箭頭）。每次分裂，端?？s短，直到最終達到所謂的衰老狀態，此時細胞停止復制并死亡。通過過度表達或抑制特定基因（例如破壞p53和RB途徑），我們可以逆轉或抑制端?？s短，使細胞繼續分裂而不達到衰老。

表1：本表展示了常見的永生化方法。每種機制都涉及破壞圖2中顯示的復制過程中的關鍵基因。右列描述了abm的永生化試劑系列中可用的形式。您可以在我們的知識庫上閱讀有關不同病毒的更多信息。

三．永生化工作流程概述

圖3：基本的細胞系永生化工作流程。

細胞系質量控制考慮

太好了！在這個階段，您已經生成了一個永生化細胞系。但是，在您開始在項目中使用您的細胞系之前，有一些重要的質量控制檢查您可以進行，以確保您的細胞系處于完美狀態。

A.您的細胞系表征

每次永生化后，您應該始終檢查您的細胞是否具有適當的標記，以及細胞的功能，以確保它代表您所使用的原代細胞。當您研究細胞途徑時，這一步尤為重要，因為您不希望永生化步驟改變了特定途徑、功能或細胞的表型。

例如，如果您計劃使用您的細胞進行細胞毒性測定，那么使用您的永生化細胞與原代細胞一起進行細胞毒性測定是個好主意，以確保您新永生化的細胞對刺激的反應與它們的原始細胞相似。

B.傳代和轉基因表達測試

將您的細胞傳代至少30次，以證明轉基因已穩定表達，并觀察它們的生長速度已提高，密度能力已增加。

C.STR分析

正如本文開頭提到的，驗證您的細胞系身份至關重要，因為可能會發生交叉污染或種群混合的問題。例如，根據《科學》雜志上發表的一篇論文，廣泛用于實驗室的著名HeLa細胞被發現污染了許多細胞系，包括Hep-2和INT407細胞系。

識別細胞系的黃金標準是短串聯重復（STR）分析。STR分析是一種方法，其中在特定位點的短串聯DNA重復與標準參考配置文件進行比較。細胞系的STR分析可以用來確認其身份，定期進行STR分析是個好主意，以確保您的細胞系沒有隨著時間的推移受到污染。

為了應對細胞系誤識別事件，資助機構如NIH現在要求在資助申請中使用的細胞系進行STR分析，許多期刊也開始鼓勵這個關鍵的質量控制檢查。

D.支原體和病原體檢測

最后，始終測試微生物污染物，如真菌、細菌和支原體是個好主意。特別是支原體，是細胞培養實驗室中最常見的污染物之一。通常很難通過顯微鏡下的視覺檢查來檢測支原體。然而，這種細菌可以影響細胞的增殖，改變其基因表達譜，并可能扭曲您的實驗結果。有許多試劑盒可用，例如abm的PCR支原體檢測和清除試劑盒，可以輕松檢測并清除50多種類型的支原體。

我們希望本文能幫助您獲得開始您的第一個細胞永生化項目所需的信心！如果永生化過程聽起來太麻煩了，不用擔心——有許多細胞系庫可用，包括abm的500+永生化細胞系和800+獨特的細胞系，用于藥物發現，全球可用。您可以在這里查看我們的目錄或索取免費的實體副本。沒有看到您正在尋找的特定細胞系，請查看下方表格（部分產品），或者請隨時與abm中國區代理，艾美捷科技聯系！400-6800-868，www.amyjet.com

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翻譯后修飾（PTMs）之于蛋白質，就像七十二變之于孫悟空。翻譯后修飾是對蛋白質的動態、嚴格調節的改變，它通過調節蛋白質的結構、空間定位和互作、從而控制其功能，PTMs主要包括磷酸化、甲基化、乙?；ˋc）、 泛素化（Ub）、SUMO1或2/3等方式，但還有許多其它的，PTMs的錯誤調節與癌癥、心力衰竭、神經和代謝性疾病等的進展有關。

Cytoskeleton 本次促銷活動產品涵蓋賴氨酸乙?；?、磷酸化、泛素化、SUMO化相關抗體、磁珠、試劑盒，蛋白分離及DNA過濾小工具等全套產品線，翻譯后修飾相關產品使用方法詳情：點擊了解

Signal-Seeker kit應用實例：

EGF處理1h后的細胞能明顯的檢測出PD-L1蛋白同時發生了泛素化（Ub）、酪氨酸磷酸化（pY）、乙?；?Ac)

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促銷活動詳情：

時間：2024年5月15日-2024年6月30日

對象：僅限中國區終端客戶

品目：賴氨酸乙?；?、磷酸化、泛素化、SUMO化相關抗體、磁珠、試劑盒等產品（詳情見下方活動品目列表）

內容： 直享?6.5 折超低優惠！

活動品目列表：

產品類別	貨號	產品名稱	規格	目錄價	折后價
抗體	CSK-AAC01	Anti-Acetyl Lysine Mouse Monoclonal Antibody	2x100ul	6211.36	4037.38
	CSK-AAC01-S	Anti-Acetyl Lysine Mouse Monoclonal Antibody	1x25ul	1741.65	1132.07
	CSK-AAC02	Anti-Acetyl Lysine Mouse Monoclonal Antibody	2x100ul	6211.36	4037.38
	CSK-AAC02-S	Anti-Acetyl Lysine Mouse Monoclonal Antibody (Trial size)	1x25ul	1741.65	1132.07
	CSK-AAC03	Anti-Acetyl Lysine Mouse Monoclonal Antibody	2x100ul	6211.36	4037.38
	CSK-AAC03-HRP	Anti-Acetyl Lysine Mouse Monoclonal Antibody HRP Conjugates	1x100ul	7120.71	4628.46
	CSK-AAC03-HRP-S	Anti-Acetyl Lysine Mouse Monoclonal Antibody HRP Conjugates (Trial size)	1x25ul	2342.75	1522.78
	CSK-AAC03-S	Anti-Acetyl Lysine Mouse Monoclonal Antibody (Trial size)	1x25ul	1741.65	1132.07
	CSK-APY03	Anti-Phosphotyrosine Mouse Monoclonal Antibody	2x100ul	6211.36	4037.38
	CSK-APY03-HRP	Anti-Phosphotyrosine-HRP Mouse Monoclonal Antibody	1x100ul	7120.71	4628.46
	CSK-APY03-HRP-S	Anti-Phosphotyrosine-HRP Mouse Monoclonal Antibody (Trial Size)	1x25ul	2250.27	1462.67
	CSK-APY03-HRP-XL	Anti-Phosphotyrosine-HRP Mouse Monoclonal Antibody	LargeQuantities	詢價	詢價
	CSK-APY03-S	Anti-Phosphotyrosine Mouse Monoclonal Antibody (Trial Size)	1x25ul	1741.65	1132.07
	CSK-ASM01	Anti-SUMO-1 Mouse Monoclonal Antibody	1x100ul	6180.53	4017.35
	CSK-ASM01-S	Anti-SUMO-1 Mouse Monoclonal Antibody (Trial Size)	1x25ul	1726.23	1122.05
	CSK-ASM23	Anti-SUMO-2/3 Mouse Monoclonal Antibody	2x100ul	6211.36	4037.38
	CSK-ASM23-HRP	Anti-SUMO-2/3 Mouse Monoclonal Antibody	1x100ul	6904.93	4488.21
	CSK-ASM23-S	Anti-SUMO-2/3 Mouse Monoclonal Antibody (Trial Size)	1x25ul	1741.65	1132.07
	CSK-ASM24	Anti-SUMO-2/3 Mouse Monoclonal Antibody	2x200ul	6334.66	4117.53
	CSK-ASM24-S	Anti-SUMO-2/3 Mouse Monoclonal Antibody (Trial Size)	1x150ul	2250.27	1462.67
	CSK-AUB01	Anti-Ubiquitin Mouse Monoclonal Antibody	2x100ul	6211.36	4037.38
	CSK-AUB01-HRP	Anti-Ubiquitin-HRP Antibody	1x100ul	7120.71	4628.46
	CSK-AUB01-HRP-S	Anti-Ubiquitin-HRP Antibody	1x25ul	2250.27	1462.67
	CSK-AUB01-S	Anti-Ubiquitin Mouse Monoclonal Antibody (Trial size)	1x25ul	1710.82	1112.03
	CSK-AUB01-XL	Anti-Ubiquitin Mouse Monoclonal Antibody	4x500ul	13501.61	8776.05
試劑盒	CSK-BK160	Signal-Seeker Phosphotyrosine Enrichment Kit (30 assays)	KIT30assays	12083.64	7854.36
	CSK-BK160-S	Signal-Seeker Phosphotyrosine Enrichment Kit (10 assays)	KIT10assays	6118.88	3977.27
	CSK-BK161	Signal-Seeker Ubiquitin Enrichment Kit (30 assays)	KIT30assays	12083.64	7854.36
	CSK-BK161-S	Signal-Seeker Ubiquitin Enrichment Kit (10 assays)	KIT10assays	6118.88	3977.27
	CSK-BK162	Signal-Seeker SUMOylation Enrichment Kit (30 assays)	KIT30assays	12083.64	7854.36
	CSK-BK162-S	Signal-Seeker SUMOylation Enrichment Kit (10 assays)	KIT10assays	6118.88	3977.27
	CSK-BK163 (30 assays)	Signal-Seeker Acetyl-Lysine Detection Kit - AAC04-Beads (30 assays)	KIT30assays	11513.36	7483.69
	CSK-BK163-S (15 assays)	Signal-Seeker Acetyl-Lysine Detection Kit - AAC04-Beads (15 assays)	KIT15assays	6118.88	3977.27
	CSK-BK164 (30 assays)	Signal-Seeker Acetyl-Lysine Detection Kit AAC03-Beads (30 assays)	KIT30assays	11513.36	7483.69
	CSK-BK165	Signal-Seeker SUMOylation-1 Enrichment Kit (30 assays)	KIT30assays	12083.64	7854.36
	CSK-BK165-S	Signal-Seeker SUMOylation-1 Enrichment Kit (10 assays)	KIT10assays	6118.88	3977.27
	CSK-BLR01	BlastR Rapid Lysate Prep Kit	50purifications	3452.47	2244.10
	CSK-BLR02	BlastR Rapid Filtration Kit	50purifications	2296.51	1492.73
	CSK-BLR03	BlastR Lysis/Dilution Kit	50lyses	2296.51	1492.73
磁珠	CSK-CIG01-beads	Control for Immunoprecipitation IgG beads	10assays	1710.82	1112.03
	CSK-CIG02-beads	Control for Acetylation Immunoprecipitation IgG beads	10assays	1710.82	1112.03
	CSK-CIG03-beads	Control for SUM01 Immunoprecipitation IgG beads	10assays	1710.82	1112.03
	CSK-CUB02-beads	Control for Ubiquitin Affinity Beads	10assays	9617.59	6251.43
	CSK-AAC02-Beads	Acetyl-Lysine Affinity Beads-AAC02	4x500ul	9617.59	6251.43
	CSK-AAC03-Beads	Acetyl-Lysine Affinity Beads-AAC03	4x500ul	9617.59	6251.43
	CSK-AAC04-Beads	Anti-Acetyl Lysine Mouse Monoclonal Antibody Agarose Conjugates	4x500ul	9617.59	6251.43
	CSK-APY03-Beads	Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads	4x300ul	9617.59	6251.43
	CSK-ASM11-Beads	SUMOylation-1 Affinity Beads	3x400ul	9617.59	6251.43
	CSK-ASM24-Beads	SUMO-2/3 Affinity Beads	2x400ul	9617.59	6251.43
	CSK-UBA01-beads	Ubiquitin Affinity Beads	40rxs	詢價	詢價
蛋白	CSK-MB201	6xHis MsrB2 Protein aa: 42-182	2x50ug	5039.99	3275.99
	CSK-MB201-XL	6xHis MsrB2 Protein aa: 42-182	1x1mg	22086.54	14356.25
	CSK-MIC01	6xHis MICAL-1 Protein Redox-CH domains	2x50ug	5748.97	3736.83
	CSK-MIC01-XL	6xHis MICAL-1 Protein Redox-CH domains	1x1mg	22086.54	14356.25
	CSK-MXA95	Actin Protein (MICAL-Oxidized): Rabbit Skeletal Muscle (Rabbit Muscle, > 95% Pure )	2x250ug	5379.07	3496.39
	CSK-MXA95-XL	Actin Protein (MICAL-Oxidized): Rabbit Skeletal Muscle (Rabbit Muscle, > 95% Pure )	1x1mg	8754.47	5690.41
	CSK-MPAX1	Pyrene Labeled Actin Protein (MICAL-Oxidized): Rabbit Skeletal Muscle (Rabbit Muscle, > 95% Pure )	2x250ug	6257.60	4067.44
	CSK-MPAX1-XL	Pyrene Labeled Actin Protein (MICAL-Oxidized): Rabbit Skeletal Muscle (Rabbit Muscle, > 95% Pure )	1x1mg	10064.56	6541.96
	CSK-AACX1	Chemically Acetylated Bovine Serum Albumin (BSA)	2x500ug	847.70	551.01

以上產品僅限研究用，不得由于診斷~

*?本活動最終解釋權歸艾美捷科技所有

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Cytoskeleton公司成立于1993年，專注于生物化學和細胞過程研究中的純化蛋白和便捷試劑盒開發與生產。公司提供藥物篩選、信號轉導、蛋白質轉錄后修飾（PTM）、細胞骨架研究相關的系列試劑盒和產品，尤其以細胞骨架相關研究見長，既能滿足于樣品較少的科學研究，也可以用于小規模篩選研究和高通量大規模篩選研究。

據了解，Cas9介導的DNA編輯最初被認為會導致隨機插入和缺失（indel）；然而，越來越多的證據表明，Cas9誘導的DNA斷裂的修復不是隨機的，而是強烈依賴于靶位點的序列背景。Cas9能以鈍化和交錯兩種方式裂解DNA，從而產生不同的編輯效果，但在很大程度上Cas9切口類型的決定因素是未知的。

在本研究中，研究人員開發了一種基于下一代測序（NGS）的方法，稱為BreakTag，用于分析Cas9誘導的DNA雙鏈斷裂（DSB）并確定Cas9切口的決定因素?？傮w而言，在約3500個單導 RNA 靶向的15萬多個內源性靶點和靶外位點，研究檢測了SpCas9介導的裂解情況。研究發現， SpCas9 介導的DSB約35%是交錯的，切口類型受DNA:gRNA互補性和工程Cas9變體的影響。

在BreakTag數據上訓練的XGBoost方法的示意圖

機器學習模型顯示，Cas9的切口取決于原間隔序列，人類基因變異會影響Cas9切口的類型和DSB修復結果。Cas9和工程變體切口與修復結果的匹配數據集表明，Cas9介導的交錯斷裂與精確、模板化和可預測的單核苷酸插入有關，這表明基于裂解的gRNA設計可用于糾正臨床相關致病性單核苷酸缺失。

文章來源：

Longo, Gabriel M. C., Sayols, Sergi, Kotini et al, Linking CRISPR–Cas9 double-strand break profiles to gene editing precision with BreakTag.DOI: 10.1038/s41587-024-02238-8.Nature Biotechnology：最新IF：68.164

據了解，在DNA過度損傷的情況下，人類細胞可以激活p53誘導細胞凋亡。缺乏p53的細胞仍然可以在DNA損傷時發生凋亡，但其相關途徑尚不清楚。

研究人員觀察到，不依賴p53的DNA損傷凋亡與翻譯抑制同時發生，翻譯抑制的特征是核糖體在罕見的亮氨酸編碼UUA密碼子上停滯，以及翻譯啟動的全面縮減?；蚝Y選發現，轉移RNA酶SLFN11和激酶GCN2分別是UUA停頓和全局翻譯抑制所需的因子。停滯的核糖體激活了由核糖體傳感器ZAKα向細胞凋亡機制傳遞的核糖毒性應激信號。

這些結果為化療無反應性腫瘤中SLFN11的頻繁失活提供了解釋，并強調了核糖體停滯是影響DNA損傷時細胞命運的信號事件。

文章來源：

Nicolaas J. Boon, Rafaela A. Oliveira et al,DNA damage induces p53-independent apoptosis through ribosome stalling.DOI: adh7950,Science：最新IF：63.714

是否為了進行這一組檢測而需要購買兩套試劑盒而感到擔憂高昂的成本？

您是否對傳統的檢測方法感到繁瑣，并且對結果的可靠性存有疑慮？

在生命科學的前沿探索中，準確評估細胞的缺氧與氧化應激狀態，對于揭示疾病機理、優化治療策略至關重要。如今，Enzo Life Sciences傾情推出ROS-ID? Hypoxia/Oxidative Stress Detection Kit（ENZ-51042-0125，ENZ-51042-K500），這是一款專為科研人員設計，二合一的創新工具，艾美捷為您推薦的ROS-ID??試劑盒直擊這一系列挑戰，以其獨特的雙色熒光標記技術，為您帶來前所未有的清晰視野。它不僅能夠直觀區分缺氧與氧化應激狀態，還能確保實驗結果的準確性和重復性，讓您的研究數據更加信服有力。

* 可單獨檢測低氧，ROS氧化應激，亦可同時檢測！

高度敏感且特異的熒光探針，可測量活細胞中的缺氧和氧化應激 適用于附著或懸浮細胞系 包括ROS和缺氧誘導劑在內的完整試劑盒 Enzo Life Sciences的ROS-ID?缺氧/氧化應激檢測套裝旨在功能性檢測活細胞（懸浮和附著細胞均適用）中的缺氧和氧化應激水平，可使用熒光顯微鏡或流式細胞術。該套裝包括缺氧（紅色）和氧化應激水平（綠色）的熒光探針作為兩個主要組成部分。

實驗原理概述：

1、缺氧檢測（紅色）：缺氧檢測試劑（Red Hypoxia Detection Reagent）是一種非熒光或弱熒光的芳香族化合物，含有硝基（NO2）基團。在缺氧細胞中，由于存在硝基還原酶活性，硝基團通過一系列化學反應被轉化為羥胺（NHOH）和氨基（NH2）基團，導致原始分子降解并釋放出熒光探針，從而在熒光顯微鏡下呈現紅色熒光。

2、氧化應激檢測（綠色）：氧化應激檢測試劑（Oxidative Stress Detection Reagent）為非熒光、細胞可滲透的總ROS檢測染料，能直接與多種活性氧物種反應，如過氧化氫、過氧亞硝酸鹽和羥基自由基，生成綠色熒光產物，指示不同類型的ROS/RNS產生。此探針對超氧化物、活性氯或溴物種相對不敏感。

產品亮點

1、精準檢測，雙管齊下：該套件同時提供綠色熒光的氧化應激檢測試劑與紅色熒光的缺氧檢測試劑，分別對應細胞內ROS水平與缺氧環境，實現精準定位與定量。

2、廣泛適用，兼容性強：無論是貼壁細胞還是懸浮細胞，無論是采用熒光顯微鏡還是流式細胞儀，ROS-ID?套件都能靈活適應，滿足您多樣化的實驗需求。兩種規格（ENZ-51042-K500與ENZ-51042-0125）量身定制，靈活選擇，經濟高效。

3、操作簡便，效率提升：我們對ROS-ID? Hypoxia/Oxidative Stress Detection Mix的準備過程進行了優化，確保實驗準備簡單快捷，減少實驗誤差，提升整體研究效率。

4、結果可視化，直觀可信：實驗設計包含正負對照，確保每次實驗都有基準參考，使您的研究結論更具說服力。熒光信號直觀顯示，細胞狀態一目了然，便于數據分析與解讀。

結果分享：

圖 1. 氧化應激（A）和低氧（B）檢測染料的吸收峰和發射峰分別為504 nm/524 nm和580 nm/595 nm。這些染料可以使用488 nm的氬離子激光器激發，并在大多數實驗流式細胞儀的FL3通道（低氧紅染料）和FL1通道（氧化應激染料）上檢測。

圖 2. HeLa 細胞被種在顯微鏡載玻片上，第二天按照手冊描述，用 DFO（低氧的化學誘導劑）或吡咯烷酮（氧化應激誘導劑）處理 4 小時，溫度為 37°C。處理后，載玻片用 PBS 洗滌，蓋上蓋玻片，并使用 Olympus BX-51 熒光顯微鏡進行可視化觀察。

圖3. 培養的人類HeLa和HL-60細胞中缺氧和氧化應激水平的檢測。細胞用缺氧誘導劑（DFO）和ROS誘導劑（花青素）處理。每個象限中的數字表示細胞（總體）的百分比。結果表明，缺氧和氧化應激染料具有特異性。

產品詳情：

應用：流式細胞術，熒光顯微鏡，熒光檢測，高通量篩選

應用說明：此試劑盒設計用于使用貼壁或懸浮細胞進行熒光顯微鏡和/或流式細胞術。

質量控制：使用流式細胞術方法進行測試，評估低氧細胞和/或具有高水平總氧化應激的細胞，并結合染料（試劑盒中提供）。還獲得顯微鏡圖像。

數量：對于-K500規格： 500次熒光顯微鏡分析或100次流式細胞分析。

對于-0125規格： 125次熒光顯微鏡分析或25次流式細胞分析。

使用/穩定性：在適當的儲存條件下，試劑盒成分穩定，直到產品標簽上注明的日期。

處理：避免凍融循環。

運輸：干冰

短期儲存：-20°C

長期儲存：-20°C

【附錄】發表文章：

Anoxia Rapidly Induces Changes in Expression of a Large and Diverse Set of Genes in Endothelial Cells: A. Antonelli, et al.; Int. J. Mol. Sci. 24, 5157 (2023), Abstract;

Cupric-ion-promoted fabrication of oxygen-replenishing nanotherapeutics for synergistic chemo and photodynamic therapy against tumor hypoxia: L. He, et al.; Acta Biomater. 162, 57 (2023), Abstract;

Precise manipulation of circadian clock using MnO2 nanocapsules to amplify photodynamic therapy for osteosarcoma: Y.X. Ge, et al.; Mater. Today Bio 19, 100547 (2023), Abstract;

The impact of hypoxia and oxidative stress on proteo-metabolomic alterations of 3D cholangiocarcinoma models: P. Phukhum, et al.; Sci. Rep. 13, 3072 (2023), Abstract;

Dimethyloxalylglycine (DMOG), a Hypoxia Mimetic Agent, Does Not Replicate a Rat Pheochromocytoma (PC12) Cell Biological Response to Reduced Oxygen Culture: R. Chen, et al.; Biomolecules 12, 541 (2022), Abstract;

Hydrogel microcapsules containing engineered bacteria for sustained production and release of protein drugs: C. Han, et al.; Biomaterials 287, 121619 (2022), Abstract;

Inhibiting autophagy flux and DNA repair of tumor cells to boost radiotherapy of orthotopic glioblastoma: Q. Xu, et al.; Biomaterials 280, 121287 (2022), Abstract;

Intracellular glucose starvation affects gingival homeostasis and autophagy: R. Li, et al.; Sci. Rep. 12, 1230 (2022), Abstract;

Intrinsic radical species scavenging activities of tea polyphenols nanoparticles block pyroptosis in endotoxin-induced sepsis: Y. Chen, et al.; ACS Nano 16, 2429 (2022), Abstract;

Iodinated cyanine dye-based nanosystem for synergistic phototherapy and hypoxia-activated bioreductive therapy: Y. Dong, et al.; Drug Deliv. 29, 238 (2022), Abstract;

Lipoprotein-biomimetic nanostructure enables tumor-targeted penetration delivery for enhanced photo-gene therapy towards glioma: R. Wang, et al.; Bioact. Mater. 13, 286 (2022), Abstract;

Microenvironment-driven sequential ferroptosis, photodynamic therapy, and chemotherapy for targeted breast cancer therapy by a cancer-cell-membrane-coated nanoscale metal-organic framework: W.L. Pan ,et al.; Biomaterials 283, 121559 (2022), Abstract;

Mitochondrial glutathione depletion nanoshuttles for oxygen-irrelevant free radicals generation: A cascaded hierarchical targeting and theranostic strategy against hypoxic tumor: B. Liang, et al.; ACS Appl. Mater. Interfaces 14, 13038 (2022), Abstract;

Multifunctional Nanosnowflakes for T1-T2 Double-Contrast Enhanced MRI and PAI Guided Oxygen Self-Supplementing Effective Anti-Tumor Therapy: Y. Lv, et al.; Int. J. Nanomedicine 17, 4619 (2022), Abstract;

Physiologic flow-conditioning limits vascular dysfunction in engineered human capillaries: K. Haase, et al.; Biomaterials 280, 121248 (2022), Abstract;

Platinum prodrug nanoparticles inhibiting tumor recurrence and metastasis by concurrent chemoradiotherapy: W. Jiang, et al.; J. Nanobiotechnology 20, 129 (2022), Abstract;

Strategy for improving cell-mediated vascularized soft tissue formation in a hydrogen peroxide-triggered chemically-crosslinked hydrogel: S.Y. Wei, et al.; J. Tissue. Eng. 13, 20417314221084096 (2022), Abstract; Full Text

A cyclic nano-reactor achieving enhanced photodynamic tumor therapy by reversing multiple resistances: P. Liu, et al.; J. Nanobiotechnology 19, 149 (2021), Abstract; Full Text

An albumin-based therapeutic nanosystem for photosensitizer/protein co-delivery to realize synergistic cancer therapy: S.L. Ai, et al.; ACS Appl. Bio. Mater. 4, 4946 (2021), Abstract;

An injectable hydrogel co-loading with cyanobacteria and upconversion nanoparticles for enhanced photodynamic tumor therapy: X. Zhang, et al.; Colloids Surf. B. Biointerfaces 201, 111640 (2021), Abstract;

Biomimetic nanoreactor for targeted cancer starvation therapy and cascade amplificated chemotherapy: F. Shao, et al.; Biomaterials 274, 120869 (2021), Abstract;

Bone-targeted erythrocyte-cancer hybrid membrane-camouflaged nanoparticles for enhancing photothermal and hypoxia-activated chemotherapy of bone invasion by OSCC: H. Chen, et al.; J. Nanobiotechnology 19, 342 (2021), Abstract; Full Text

Combination of coumarin and doxorubicin induces drug-resistant acute myeloid leukemia cell death: N.S. Al-Abbas, et al.; Heliyon 7, e06255 (2021), Abstract; Full Text

Encapsulating an acid-activatable phthalocyanine–doxorubicin conjugate and the hypoxia-sensitive tirapazamine in polymeric micelles for multimodal cancer therapy: X. Guo, et al.; Biomater. Sci. 9, 4936 (2021), Abstract;

Exploiting the acquired vulnerability of cisplatin-resistant tumors with a hypoxia-amplifying DNA repair-inhibiting (HYDRI) nanomedicine: J. Chen, et al.; Sci. Adv. 7, 5267 (2021), Abstract;

Extracellular matrix-induced GM-CSF and hypoxia Promote Immune Control of Mycobacterium tuberculosis in Human In Vitro Granulomas: A. Arbues, et al.; Front. Immunol. 12, 727508 (2021), Abstract; Full Text

Immune/Hypoxic Tumor Microenvironment Regulation-Enhanced Photodynamic Treatment Realized by pH-Responsive Phase Transition-Targeting Nanobubbles: M. Zhao, et al.; ACS Appl. Mater. Interfaces 13, 32763 (2021), Abstract;

Mitochondria-targeted and ultrasound-responsive nanoparticles for oxygen and nitric oxide codelivery to reverse immunosuppression and enhance sonodynamic therapy for immune activation: C. Ji, et al.; Theranostics 11, 8587 (2021), Abstract; Full Text

MnO2-based nanomotors with active fenton-like Mn2+ delivery for enhanced chemodynamic therapy: J. Ou, et al.; ACS Appl. Mater. Interfaces 13, 38050 (2021), Abstract;

Mucin 1 regulates the hypoxia response in head and neck cancer cells: K. Utispan, et al.; J. Pharmacol. Sci. 147, 331 (2021), Abstract;

Ruthenium (II) complexes coordinated to graphitic carbon nitride: Oxygen self-sufficient photosensitizers which produce multiple ROS for photodynamic therapy in hypoxia: F. Wei, et al.; Biomaterials 276, 121064 (2021), Abstract;

Stratified 3D microtumors as organotypic testing platforms for screening pancreatic cancer therapies: M.V. Monteiro, et al.; Small Methods 5, e2001207 (2021), Abstract;

Synergy of hypoxia relief and heat shock protein inhibition for phototherapy enhancement: G. Zhang, et al.; J. Nanobiotechnology 19, 9 (2021), Abstract; Full Text

The New Serum-Free OptiPASS ? Medium in Cold and Oxygen-Free Conditions: An Innovative Conservation Method for the Preservation of MDA-MB-231 Triple Negative Breast Cancer Spheroids: A. Goisnard, et al.; Cancers 13, 1945 (2021), Abstract; Full Text

Biomimetic decoy inhibits tumor growth and lung metastasis by reversing the drawbacks of sonodynamic therapy: H. Zhao, et al.; Adv. Healthc. Mater. 9, e1901335 (2020), Application(s): Fluorescence microscopy using 4T1 cells, Abstract;

Remodeling extracellular matrix based on functional covalent organic framework to enhance tumor photodynamic therapy: S.B. Wang, et al.; Biomaterials 234, 119772 (2020), Application(s): Fluorescence microscopy using CT26 cells, Abstract;

A two-photon excited O2-evolving nanocomposite for efficient photodynamic therapy against hypoxic tumor: R.Q. Li, et al.; Biomaterials 194, 84 (2019), Application(s): Fluorescence microscopy using 4T1 cells, Abstract;

Combinational phototherapy and hypoxia-activated chemotherapy favoring antitumor immune responses: B. Ma, et al.; Int. J. Nanomedicine 14, 4541 (2019), Application(s): Fluorescence microscopy using 4T1 cells, Abstract; Full Text

Di-(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP) inhibits steroidogenesis and induces mitochondria-ROS mediated apoptosis in rat ovarian granulosa cells: A. Tripathi, et al.; Toxicol. Res. (Camb.) 8, 381 (2019), Application(s): Flow cytometry using granulosa cells, Abstract;

Encircling granulosa cells protects against di-(2-ethylhexyl)phthalate-induced apoptosis in rat oocytes cultured in vitro: A. Tripathi, et al.; Zygote 27, 203 (2019), Abstract;

Endogenous oxygen generating multifunctional theranostic nanoplatform for enhanced photodynamic-photothermal therapy and multimodal imaging: K. Wu, et al.; Theranostics 9, 7697 (2019), Application(s): Confocal microscopy using HeLa cells, Abstract; Full Text

Glutathione depletion and dual-model oxygen balance disruption for photodynamic therapy enhancement: W. Li, et al.; Colloids Surf. B Biointerfaces 183, 110453 (2019), Application(s): Fluorescence microscopy using 4T1 cells, Abstract;

Investigation of PPIX-Lipo-MnO2 to enhance photodynamic therapy by improving tumor hypoxia: L. Chudal, et al.; Mater. Sci. Eng. C Mater. Biol. Appl. 104, 109979 (2019), Application(s): Fluorescence microscopy using MCF-7 cells, Abstract;

Laser-triggered polymeric lipoproteins for precision tumor penetrating theranostics: R. Wang, et al.; Biomaterials 221, 119413 (2019), Application(s): Fluorescence microscopy using 4T1 cells, Abstract;

Monodispersed copper (I)‐based nano metal–organic framework as a biodegradable drug carrier with enhanced photodynamic therapy efficacy: X. Cai, et al.; Adv. Sci. 6, 1900848 (2019), Application(s): Fluorescence microscopy using 4T1 cells, Abstract; Full Text

Oral ferroportin inhibitor ameliorates ineffective erythropoiesis in a model of β-thalassemia: V. Manolova, et al.; J. Clin. Invest. 130, 491 (2019), Application(s): Flow cytometry analysis using mouse red blood cells, Abstract;

Oxygen-supplementing mesoporous polydopamine nanosponges with WS2 QDs-embedded for CT/MSOT/MR imaging and thermoradiotherapy of hypoxic cancer: Y. Wang, et al.; Biomaterials 220, 119405 (2019), Application(s): Fluorescence microscopy using 4T1 cells, Abstract;

Self-generating oxygen enhanced mitochondrion-targeted photodynamic therapy for tumor treatment with hypoxia scavenging: Z. Yang, et al.; Theranostics 9, 6809 (2019), Application(s): Fluorescence microscopy using MKN-45P cells, Abstract; Full Text

Solid matrix-supported supercritical CO2 enhances extraction of γ-linolenic acid from the cyanobacterium Arthrospira (Spirulina) platensis and bioactivity evaluation: X. Yang, et al.; Mar. Drugs 17, 203 (2019), Application(s): Fluorescence microscopy using Zebrafish larvae, Abstract; Full Text

All-in-one theranostic nanoplatform based on hollow MoSx for photothermally-maneuvered oxygen self-enriched photodynamic therapy: J. Wang, et al.; Theranostics 8, 955 (2018), Application(s): Fluorescence microscopy using 4T1 cells, Abstract; Full Text

Fluorinated polymeric micelles to overcome hypoxia and enhance photodynamic cancer therapy: Q. Wang, et al.; Biomater. Sci. 6, 3096 (2018), Abstract;

High glucose-induced oxidative stress impairs proliferation and migration of human gingival fibroblasts: P. Buranasin, et al.; PLoS One 13, e0201855 (2018), Abstract; Full Text

Light-enhanced hypoxia-responsive nanoparticles for deep tumor penetration and combined chemo-photodynamic therapy: Z. Li, et al.; Chem. Commun. 54, 13127 (2018), Abstract;

LSD1 mediated changes in the local redox environment during the DNA damage response: M.L. Duquette, et al.; PLoS One 13, e0201907 (2018), Abstract; Full Text

Platelet-mimicking nanoparticles co-loaded with W18O49 and metformin alleviate tumor hypoxia for enhanced photodynamic therapy and photothermal therapy: H. Zuo, et al.; Acta Biomater. 80, 296 (2018), Abstract;

Tumor starvation induced spatiotemporal control over chemotherapy for synergistic therapy: M.K. Zhang, et al.; Small 14, e1803602 (2018), Abstract;

Investigating the application of a nitroreductase-expressing transgenic zebrafish line for high-throughput toxicity testing: A.C. Chlebowski, et al.; Toxicol. Rep. 4, 202 (2017), Application(s): Use of hypoxia detection reagent with zebrafish embryos,

Modulation of alveolar macrophage innate response in proinflammatory-, pro-oxidant-, and infection- models by mint extract and chemical constituents: Role of MAPKs: N. Yadav & H. Chandra; Immunobiology 223, 49 (2017), Abstract;

Nitroimidazole derivatives of polypyridyl ruthenium complexes: Towards understanding their anticancer activity and mode of action: O. Mazuryk, et al.; Eur. J. Pharm. Sci. 101, 43 (2017), Application(s): Flow cytometry analysis using HaCaT and PANC-1 cells, Abstract;

Prodrug-embedded angiogenic vessel-targeting nanoparticle: A positive feedback amplifier in hypoxia-induced chemo-photo therapy: D. Guo, et al.; Biomaterials 144, 188 (2017), Application(s):Condocal Microscopy, Abstract; Full Text

Tumor-penetrating nanoparticles for enhanced anticancer activity of combined photodynamic and hypoxia-activated therapy: Y. Wang, et al.; ACS Nano 11, 2227 (2017), Application(s): Flow cytometry analysis of mouse breast carcinoma cells, Abstract; Full Text

Analysis of a nitroreductase-based hypoxia sensor in primary neuronal cultures: B.N. Lizama-Manibusan, et al.; ACS Chem. Neurosci. 7, 1188 (2016), Abstract;

ERK2 and CHOP restrict the expression of the growth-arrest specific p20K lipocalin gene to G0: M.J. Erb, et al.; Mol. Cell. Biol. 36, 2890 (2016), Application(s): Hypoxia levels in chick embryo fibroblasts (CEF), Abstract;

Phagocyte respiratory burst activates macrophage erythropoietin signalling to promote acute inflammation resolution: B. Luo, et al.; Nat. Commun. 7, 12177 (2016), Application(s): Flow cytometry analysis of hypoxia in exudate leukocytes and peritoneum, Abstract; Full Text

Selective advantage of trisomic human cells cultured in non-standard conditions: S.D. Rutledge, et al.; Sci. Rep. 6, 22828 (2016), Application(s): Fluorescence microscopy on human colorectal adenocarcinoma DLD1 cells, Abstract; Full Text

Low-level light in combination with metabolic modulators for effective therapy of injured brain: T. Dong, et al.; J. Cereb. Blood Flow Metab. 35, 1435 (2015), Application(s): Immunofluorescence Assay, Abstract; Full Text

Quantitative measurement of redox potential in hypoxic cells using SERS nanosensors: J. Jiang, et al.; Nanoscale 6, 12104 (2014), Abstract;