Biotium細胞外囊泡(EV)染色第三彈——EXOBRITE™?相關抗體&磁珠

細胞外囊泡(EV)染色試第一彈:ExoBrite™ 細胞外囊泡(EV)染色試劑盒。

細胞外囊泡(EV)染色試第一彈:EXOBRITE CTB EV染色試劑盒

 

1.Exobrite流式抗體偶聯物

常用的細胞外囊泡(EV)標記蛋白是CD9、CD63和CD81,它們都是四白蛋白家族的成員。雖然針對這些蛋白質的抗體可通過商業供應商獲得,但很少有抗體被驗證或用于檢測EV或外泌體。設計并驗證了用于流式細胞術的ExoBrite Flow Antibody偶聯物,在純化和串珠結合的EV中提供明亮的信號和低背景的EV標記物。ExoBrite 同型對照流式抗體已被發現不與人類細胞中的任何靶標發生反應,并且與tetraspanin抗體具有相同的同型。

 

ExoBrite流式抗體的優勢:

  • 開發用于流式細胞儀檢測EV標記CD9, CD63和CD81
  • 純化的珠狀結合EV驗證
  • 明亮信號和低背景
  • ExoBrite同型對照流式抗體
  • 多種顏色可用,于Pacific Blue, FITC和PE通道

 

結果展示:

SEC純化的A549衍生EVs用ExoBrite™ 650/665 CD9流式抗體染色(左),與緩沖液中的相同抗體相比,可以看到特異性染色(右),在APC通道中的CytoFLEX-LX流式細胞儀上檢測到外泌體。
SEC純化的MCF-7衍生EVs用ExoBrite™ 560/585 CD63流式抗體染色(左),與緩沖液中的相同抗體相比,可以看到特異性染色(右),在PE通道中的CytoFLEX-LX流式細胞儀上檢測外泌體。
SEC純化的MCF-7衍生EVs用ExoBrite™ 410/450 CD81流式抗體染色(左),與緩沖液中的相同抗體相比,可以看到特異性染色(右),在Pacific Blue通道中的CytoFLEX LX流式細胞儀上檢測到外泌體。

 

相關產品推薦:

產品名稱 偶聯物 檢測通道 規格 貨號
ExoBrite™ CD9 Flow Antibody ExoBrite™ 410/450
ExoBrite™ 490/515
ExoBrite™ 560/585
ExoBrite™ R-PE
Pacific Blue ™
FITC
PE
25 tests
100 tests
P003-410… P003-RPE
ExoBrite™ CD63 Flow Antibody P004-410… P004-RPE
ExoBrite™ CD81 Flow Antibody P005-410… P005-RPE
ExoBrite™ IgG1 Isotype Control Flow Antibody P008-410… P008-RPE

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2.ExoBrite親和素磁珠

使用ExoBrite Streptavidin磁珠簡化EV和外泌體分離工作流程,與同類產品相比,該磁珠可提供更低的背景和更高的EV捕獲靈敏度。這些鏈霉親和素包被和磁性聚苯乙烯珠(直徑4.5um)可用于從細胞培養基或其他生物流體中分離EV,而無需過夜沉淀步驟。

ExoBrite 親和素磁珠的優點:

  • 結合生物素化抗體(不包括)分離EV,
  • 無需過夜沉淀步驟從生物體液中分離EV,
  • 比競爭對手更低的背景和更高的靈敏度方便的磁分離,
  • 通過顯微鏡,流式細胞術或western blot檢測下游

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結果展示:

首先將ExoBrite™ 鏈霉親和素磁珠與(橙色點)或不與(灰色點)生物素化的CD9抗體一起孵育,然后與濃縮的MCF-7細胞上清液一起孵育。EV被ExoBrite™ 560/585 CTB EV染色,并通過流式細胞儀在PE通道中檢測。 首先將ExoBrite™ 鏈霉親和素磁珠與(橙色點)或不與(灰色點)生物素化的CD63抗體一起孵育,然后與濃縮的MCF-7細胞上清液一起孵育。結合的EV被ExoBrite™ 560/585 CTB EV染色,并通過流式細胞儀在PE通道中檢測。
首先將ExoBrite™ 鏈霉親和素磁珠與(橙色點)或不與(灰色點)生物素化的CD81抗體一起孵育,然后與濃縮的MCF-7細胞上清液一起孵育。EV被ExoBrite™ 560/585 CD9流式抗體染色,并通過流式細胞儀在PE通道中檢測。 首先將ExoBrite™ 鏈霉親和素磁珠與(橙色點)或不與(灰色點)生物素化的CD81抗體一起孵育,然后與濃縮的MCF-7細胞上清液一起孵育。EV被ExoBrite™ 560/585 CTB EV染色,并通過流式細胞儀在PE通道中檢測。

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相關產品推薦:

產品名稱 規格 貨號
ExoBrite Streptavidin Magnetic Beads 5mL 28000

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?3.ExoBrite超分辨率成像

由于外泌體和EVs的體積小和光學顯微鏡的分辨率限制,通過成像來表征它們仍然是一個挑戰。超分辨率顯微鏡技術,如直接隨機光學重建顯微鏡(dSTORM),超越了傳統光學顯微鏡的衍射極限,允許對EVs等亞細胞結構進行單分子分辨率。

 

ExoBrite™ STORM CTB EV染色劑是為EV的STORM成像而開發的,有四種經過STORM驗證的CF?染料可供選擇。ExoBrite™ 560/585已經在ONI納米成像儀S Mark II上驗證了dSTORM,從而可以研究精細的形態學細節,并與EV生物標志物(如四跨蛋白CD9、CD63和CD81)共染色。

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ExoBrite的優勢™ STORM CTB EV染色:

  • 深入了解EV的形態和結構
  • 用于STORM成像EV的最佳配方CTB偶聯物
  • 有4種CF?染料可用于STORM成像
  • 允許與EV生物標志物進行抗體共染色和定位研究

 

結果展示:

人類結直腸癌細胞系衍生EVs的超分辨dSTORM圖像。EVs用抗tetraspanin抗體(抗CD9/CD63/CD81混合物,均與CF?647綴合,顯示為品紅色)和1X ExoBrite染色™ 560/585(青色)。使用ONI的EV Profiler試劑盒制備樣品,并使用來自ONI(Oxford Nanoimaging, UK)的納米成像儀s Mark II獲取樣品。使用ONI基于云的數據分析平臺CODI的測試版來處理數據。比例尺為500 nm(縮小,左側),單個EV面板為50 nm(右側)。圖片由ONI提供。

 

相關產品推薦:

產品名稱 Ex/Em (nm) 激光(s) (nm) 檢測通道 規格 貨號
ExoBrite™ STORM CF?505 CTB EV Staining Kit 505/519 488 FITC 100 Labelings 30115-T
500 Labelings 30115
ExoBrite™ STORM CF?583R CTB EV Staining Kit 583/609 555 or 561 Rhodamine or
Texas Red?
100 Labelings 30116-T
500 Labelings 30116
ExoBrite™ STORM CF?647 CTB EV Staining Kit 652/668 633-640 Cy?5 100 Labelings 30117-T
500 Labelings 30117
ExoBrite™ STORM CF?680 CTB EV Staining Kit 681/698 633-640 Cy?5.5 100 Labelings 30118-T
500 Labelings 30118

 

4.Exobrite Western Blot抗體偶聯物

ExoBrite™ 通過近紅外熒光蛋白質印跡驗證了蛋白質抗體在EV提取物中提供明亮的信號和低背景的EV標記物CD9、CD63和CD81??贵w有兩種近紅外熒光染料ExoBrite™ 680/700和ExoBrite™ 770/800,其提供比用于蛋白質印跡的具有可見光發射的染料更大的信噪比。

ExoBrite Calnexin WB抗體可檢測內質網中不存在的一種蛋白質。作為評價EV提取物純度的陰性對照。

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ExoBrite™ WB抗體的優勢:

  • 開發用于通過熒光蛋白質印跡檢測EV標記物CD9、CD63和CD81
  • 經驗證可與EV提取物一起使用
  • 明亮的信號和低背景
  • 有兩種近紅外顏色可選
  • 陰性對照ExoBrite™ Calnexin WB可用

 

結果展示:

用ExoBrite™680/700 CD9蛋白抗體對MCF-7細胞和EV裂解物中人CD9進行Western檢測,顯示CD9在EV制劑中富集。 用ExoBrite™680/700 CD63蛋白抗體對MCF-7細胞和EV裂解物中人CD63進行Western檢測,顯示CD63在EV制劑中富集。
用ExoBrite™ 680/700 CD81蛋白抗體對MCF-7細胞和EV裂解物中人CD81進行Western檢測,顯示EV制劑中CD81的富集。 用ExoBrite™ 770/800 calnexin WB抗體檢測MCF-7細胞和EV裂解物中的人鈣蛋白酶,顯示EV制劑中缺乏calnexin。

 

相關產品推薦:

產品名稱 偶聯物 規格 貨號
ExoBrite™ CD9 Western Antibody ExoBrite™ 680/700
ExoBrite™ 770/800
25 tests
100 tests
P003-680, P003-770
ExoBrite™ CD63 Western Antibody P004-680, P004-770
ExoBrite™ CD81 Western Antibody P006-680, P006-770
ExoBrite™ Calnexin Western Antibody ExoBrite™ 770/800 P007-770

 

Biotium公司是一家在熒光技術領域獨樹一幟的生物技術公司,公司位于美國加利福尼亞的BAY AREA------世界上首要的生物科技中心。該公司一直致力于開發和生產用于生物醫學研究的熒光指示劑及其他特殊生化產品。其產品被廣泛應用于細胞生 物學、蛋白質組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經科學、血液流動檢測及大規模藥物篩選等眾多領域。Biotium公司專利產品眾多,包括已經被廣泛使用的實時PCR定量熒光染料EvaGreen、具有劃時代意義的凝膠核酸染料Gel Red和GelGreen,以及最新推出的Cheetah Taq熱啟動酶和CF系列蛋白質標記染料等。

 

目前,Biotium已將其許多專利技術授權給一些主要的國際生物技術公司,包括安捷倫、BD生物科學、Biolegend、BioRad、EMD Millipore、Illumina、PerkinElmer、Qiagen、Roche、Sartorius AG、Sigma-Aldrich、Thermo Fisher Scientific等。 ? 寶天生物科技(BTProbes)由美國知名熒光試劑企業Biotium公司于2007年在華成立,是一家專注于生物熒光試劑研發的高科技企業,是多家歐美企業長期供貨商,產品被廣泛應用于生命科學各個領域。目前寶天可提供超過100款熱賣的熒光蛋白(PE, APC),其他熒光原料(FITC),用于PCR熒光原料(5-FAM,6-TAMRA)等。

 

作為Biotium在中國的區域總代理,艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的Biotium的產品。

 

艾美捷科技優勢代理品牌

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