EZMeta™?雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒–簡單、靈敏、快速

你想驗證miRNA對靶基因的影響嗎?——雙熒光素酶報告基因測定

你想了解miRNA和lncRNA/circRNA之間的靶向相互作用嗎?——雙熒光素酶報告基因測定

你想知道下游基因的轉錄因子是什么嗎?——雙熒光素酶報告基因測定

是的，雙熒光素酶系統是如此強大!

雙熒光素酶（Dual-Luciferase）報告基因系統是一種常用的生物學實驗技術，用于研究基因表達和調控。雙熒光素酶報告基因通常以螢火蟲熒光素酶（Luciferase）為報告基因，海腎熒光素酶（Renilla Luciferase）為內參基因。該報告系統具有檢測速度快、靈敏度高、動態范圍寬、無細胞內有源干擾等優點。廣泛應用于基因調控和非編碼RNA靶向相互作用的研究領域。今天，我們將重點討論這個話題。

熒光素酶（Luciferase）來自于北美螢火蟲，它能夠催化熒光素底物的氧化反應，產生可見光。這種發光反應非常靈敏和特異，使得熒光素酶成為研究基因表達和調控的理想工具。通過將熒光素酶基因與感興趣的基因啟動子或調控序列連接，可以構建熒光素酶報告基因，用于研究基因的轉錄活性和調控機制。

另一方面，海腎熒光素酶（Renilla Luciferase）是一種海洋生物海腎中發現的發光酶，其發光機制與螢火蟲熒光素酶不同。海腎熒光素酶熒光素酶（Renilla Luciferase）可以被共同底物，底物共軛的熒光素底物所催化，產生另一種發光。通過將海腎熒光素酶（Renilla Luciferase）基因與內部對照序列連接，可以構建報告基因，用于對實驗條件的標準化和校正。

雙熒光素酶報告基因系統利用雙熒光素酶同時進行檢測，可以實現基因表達的定量和標準化。通過測量兩種發光信號的強度比例，可以減少實驗誤差和干擾，提高結果的可靠性和準確性。這種系統廣泛應用于基因調控研究、藥物篩選、信號通路分析等領域。

EZMeta™?雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒提供了一種簡單、靈敏、快速的 檢測方法，產品基本信息如下。

【產品基本信息】

貨號：D-AKC8010

規格：100T?/ 1000T

適用樣本：細胞、原生質體、植物葉片

儲存：-20℃保存12個月

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【產品基本原理】

在 ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）可以催化螢火蟲熒光素（Luciferin）生成氧化熒光素（Oxyluciferin），在熒光素被氧化的過程中，會產生光信號。在氧氣存在的條件下，海腎熒光素酶（Renilla luciferase）可以催化腔腸素（Coelenterazine）氧化成腸酰胺（Coelenteramide），在腔腸素氧化的過程中也會產生光信號。通過熒光素酶和其底物這一生物發光體系，可以非常靈敏、高效地檢測基因的表達。

通常把感興趣基因的轉錄調控元件或 5'-啟動子區克隆在 Luciferase 的上游，或把 3'-UTR 區克隆在 Luciferase 的下游，構建成報告基因（Reporter gene）質粒，然后轉染細胞，用適當藥物等處理細胞后裂解細胞，通過檢測熒光素酶活性的高低來判斷藥物處理等對目的基因的轉錄調控作用。海腎熒光素酶更多地被用作檢測轉染效率的內參，以消除細胞數量和轉染效率的差異。雙熒光素酶報告基因檢測試劑盒先以螢火蟲熒光素為底物檢測螢火蟲熒光素酶活性，然后加入抑制螢火蟲熒光素酶催化的物質，同時加入腔腸素檢測海腎熒光素酶活性，實現雙熒光素酶報告基因檢測。該試劑盒具有檢測迅速、靈敏度高、檢測范圍廣，無細胞內源活性干擾等特點。

【產品注意事項】

1. 由于溫度對酶反應有影響，所以測定時，樣品和試劑均需達到室溫后再進行檢測。
2. 為取得最佳測定效果，在用單管的化學發光儀測定時，每個樣品和測定試劑混合后到測定前的時間應盡量控制一致；使用具有化學發光測定功能的多功能熒光酶標儀時，宜先把樣品全部加好，然后統一加入。
3. 檢測時需使用全黑色或白色的 96 孔板，防止相鄰孔的干擾。
4. 螢火蟲熒光素酶催化的生物發光的最強波長為 560 nm，海腎熒光素酶催化的生物發光的最強波長為 480 nm。
5. Renilla Luciferase Substrate 易揮發，注意密封保存。

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總之，雙熒光素酶報告基因系統的起源于螢火蟲和海腎中的發光酶，并且在基因表達和調控研究中發揮著重要作用。它提供了一種靈敏、可靠和高通量的方法，用于研究基因的轉錄活性和調控機制。

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