經典的培養基有很多種,其中 DMEM、 RPMI 1640、 MEM 、 DMEM/F12 都是應用最廣泛的培養基。其他 如 M199 、 IMDM 、 L15培養基等也用于某些細胞的培養。至于選擇何種培養基并沒有一定的標準,有幾點建議可供參考。
經典的培養基有很多種,其中 DMEM、 RPMI?1640、 MEM 、 DMEM/F12 都是應用最廣泛的培養基。其他 如 M199 、 IMDM 、 L15培養基等也用于某些細胞的培養。其具體的特征及應用如下:
1、BME細胞培養基
基礎Eagle培養基(Basal?Medium?Eagle),1955年Eagle設計,BSS+12種氨基酸+谷氨酰胺+8種維生素。簡單、便于添加,適于各種傳代細胞系和特殊研究用,在此基礎上改良的細胞培養基品種有MEM、DMEM、IMDM等。
2、MEM細胞培養基
又稱低限量Eagle培養基(Minimal?Essential?Medium),1959年在Eagle's基礎培養基(BME)上修改而來,刪去賴氨酸、生物素,氨基酸濃度增加,適合多種細胞單層生長,有可高壓滅菌品種,是一種最基本、試用范圍最廣的培養基,但因其營養成分所限,針對生產之特定細胞培養與表達時,并不一定是使用效果最佳或者最經濟的培養基。
3、DMEM細胞培養基
DMEM是由Dulbecco改良的Eagle培養基,起初是為小鼠成纖維細胞設計的。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍,維生素濃度是MEM的4倍,采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。最初的配方中葡萄糖含量為1000?mg/L,后來為了某些細胞的生長需要,將葡萄糖含量又調整為4500?mg/L,這就是大家常說的低糖和高糖了。
低糖適于依賴性貼壁細胞培養,特別適用于生長速度快、附著性較差的腫瘤細胞培養。高糖更適合高密度懸浮細胞培養,也適用于附著性較差,但又不希望它脫離原來生長點的克隆培養,也可用于雜交瘤中骨髓瘤細胞和DNA轉染的轉化細胞的培養。例如CHO細胞表達生產乙肝疫苗、CHO細胞表達EPO。
4、IMDM細胞培養基
Guilber?和Iscove將Dulbecco'?Medium?改良為?Iscove's?Medium,用于培養紅細胞和巨噬細胞前體。此種培養液含有硒、額外的氨基酸和維生素、丙酮酸鈉和HEPES。并用硝酸鉀取代了硝酸鐵。IMDM還能夠促進小鼠B淋巴細胞,LPS刺激的B細胞,骨髓造血細胞,T細胞和淋巴瘤細胞的生長。IMDM為營養非常豐富的培養液,因此可以用于高密度細胞的快速增殖培養。
5、RPMI-1640細胞培養基
Moore等人于1967年在Roswell?Park?Memorial?Institute研制,針對淋巴細胞培養設計,含BSS+21種氨基酸+維生素11種等?,F也用于懸浮細胞培養,如哺乳動物、特殊造血細胞、正?;驉盒栽錾陌准毎?,雜交瘤細胞的培養,其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細胞、T細胞淋巴瘤細胞以及HCT-15上皮細胞等均可參考使用。
6、HamF10細胞培養基
1963年Ham設計,含微量元素,可在血清含量低時用,適用于克隆化培養。F10適用于倉鼠、人二倍體細胞,特適于羊水細胞培養。
7、DMEM/F12細胞培養基
Ham's?F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而設計的,現在也廣泛應用于克隆形成率的分析及原代培養。F12還可以與DMEM等體積混合使用,得到一種高濃度與成分多樣化相結合的產物,這種培養基已應用于許多原代培養及更難養的細胞系的培養。由于營養成分豐富,且可以使用較少血清,故也常作為無血清培養基的基礎培養基。
8、M199細胞培養基
1950年Morgan等設計的具有確定化學成分的細胞培養液,即M-199。除BSS外,含有53種成分,為全面培養基,主要用于雞胚成纖維細胞培養。此培養液必須輔以血清才能支持長期培養。M-199可用于培養多種種屬來源的細胞,并能培養轉染的細胞?,F廣泛用于病毒學、疫苗生產。
9、McCoy5A培養基
1959年MeCoy為肉瘤細胞設計,BSS+40種成分??芍С侄喾N(如骨髓、皮膚、肺和脾臟等)的原代移植物的生長,除適于一般的原代細胞培養外,主要用于作組織活檢培養、一些淋巴細胞培養以及一些難培養細胞的生長支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纖維細胞、人淋巴細胞、HT-29、BHL-100等上皮細胞。
10、L15 細胞培養基
L-15培養液適用于快速增殖瘤細胞的培養,用于在CO2缺乏的情況下培養腫瘤細胞株。此培養液采用磷酸鹽緩沖體系,氨基酸組成進一步改良,并由半乳糖替代了葡萄糖。
至于選擇何種培養基并沒有一定的標準,有幾點建議可供參考:
(1)建立某種細胞株所用的培養基應該是培養這種細胞首選的培養基??梢圆殚唴⒖嘉墨I,或在購買細胞株時咨詢。也可以在一些生物公司的網站上搜索,如Invitrogen網站上有一個Cell?Line?Database的工具,選擇你感興趣的細胞類型,它就會彈出推薦的培養基、血清和轉染試劑等,有時還有優化好的轉染步驟,很方便。
(2)?其它實驗室慣用的培養基不妨一試,許多培養基可以適合多種細胞。
(3)?根據細胞株的特點、實驗的需要來選擇培養基。如小鼠細胞株多選RPMI1640?。
(4)?用多種培養基培養目的細胞,觀察其生長狀態,可以用生長曲線、集落形成率等指標判斷,根據實驗結果選擇最佳培養基,這是最客觀的方法,但比較繁瑣。
2016年11月14日 上午 10:21 沙發
要是把常見細胞系與培養基類型對應起來,那就更好啦~