活細胞/死細胞雙染試劑盒(Calcein-AM/PI)

Calcein-AM是一種用于活細胞熒光標記的細胞染色試劑,通過增強Calcein的疏水性,它能夠輕松穿透活細胞膜。一旦進入細胞質,酯酶會將Calcein-AM水解為Calcein,使其留在細胞內并發出強綠色熒光。與BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate等類似試劑相比,Calcein-AM是最適合作為活細胞熒光探針的選擇,因為它具有較低的細胞毒性。Calcein的激發波長為490nm,發射波長為515nm。

相比之下,作為核染色劑的PI無法穿透活細胞膜,它通過死細胞膜的無序區域進入細胞核,并嵌入細胞的DNA雙螺旋結構,產生紅色熒光。因此,PI只能用于死細胞染色。它的激發波長為488nm和545nm,發射波長為617nm。

 

由于Calcein和PI-DNA都可被490nm激發,因此可用熒光顯微鏡同時觀察活細胞和死細胞。用545nm激發,僅可觀察到死細胞。根據以上特點,Calcein?AM和PI經常被結合用來作為活細胞和死細胞的雙重染色。

 

今天就給大家帶來一款基于Calcein?AM和PI的活死細胞雙染試劑盒(B-CHK103),本染色方法適用于熒光顯微鏡、熒光酶標儀等微孔板熒光掃描設備、流式細胞儀或其他的熒光設備。本染色方法適用于大多數真核細胞,包括貼壁細胞和某些組織樣本,但不包括細菌和酵母樣本。

 

 

需要注意的是Calcein?AM/PI雙染有效染色的前提是相應的細胞模型的活力變化是指酶活性變化和質膜完整性變化這些物理和生化特性,不影響這些細胞特性的細胞毒性事件可能不能使用此方法進行準確評估。

 

不同檢測平臺的建議步驟:

 

熒光顯微鏡檢測:

  • 準備樣本細胞。
  • 用PBS洗滌細胞2~3次。
  • 用100~150μL染色工作液A至蓋玻片將細胞樣品覆蓋(或重懸)。
  • 在室溫或37℃避光孵育20~45分鐘。
  • 用PBS洗滌細胞。
  • 用100~150μL染色工作液B至蓋玻片將細胞覆蓋(或重懸)。
  • 在室溫或37℃避光孵育10~45分鐘。
  • 用PBS洗滌細胞。
  • 用熒光顯微鏡檢測結果。最大激發為490nm,最大發射波長分別為515nm和617nm。

 

流式細胞儀檢測:

  • 收集細胞:可以用胰酶-EDTA等消化細胞,制備成細胞懸液。
  • 用PBS洗滌細胞兩次。
  • 制備1mL細胞懸浮液,濃度為0.1至5×106細胞/mL。細胞可以在無血清培養基或其他緩沖液中重懸。
  • 在細胞中加入適量Calcein-AM溶液和適量PI母液,混勻。
  • 在室溫或37℃避光孵育15~30分鐘。
  • 盡快用流式細胞儀檢測結果。

 

熒光酶標儀檢測:

  • 在微孔板中準備細胞樣本孔以及對照孔。
  • 用PBS洗滌細胞2~3次。
  • 加入200μL染色工作液。
  • 在室溫或37℃避光孵育15~45分鐘.
  • 用PBS洗滌細胞。
  • 加入適量PBS。
  • 用熒光酶標儀/熒光光度計檢測結果。最大激發波為490nm,最大發射波長為525nm和617nm。

 

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貨號 名稱 規格
B-CHK103 Calcein-AM/PI, Live/Dead Cell Double Staining Kit 500T

 

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