活力檢測全套工具及微生物(細菌,真菌&酵母)熒光染色

酵母和真菌染色在酵母和真菌研究中,常使用熒光染料和試劑盒對酵母細胞進行染色。這些染料和試劑盒包括活性染料、組合染色試劑盒和細胞器染色劑,廣泛應用于多色顯微鏡或流式細胞術實驗中。通過結合這些染料,可以實現最大程度的實驗多功能性,為研究人員提供更全面的細胞分析和觀察。

 

Biotium提供了一系列不同的熒光活力染料和試劑盒,以允許通過顯微鏡或流式細胞區分活酵母細胞和死酵母細胞(參見下面的活力PCR部分,了解通過qPCR檢測活酵母)。

 

我們的許多細胞器和細胞染色劑可用于對酵母細胞進行染色。我們還提供可以染色發芽酵母細胞壁和出芽痕的染色劑。

 

?酵母細胞器染色

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2、細菌熒光染色

對于細菌,我們提供熒光染料來染色活細胞、死細胞和革蘭氏陽性細胞,在多色顯微鏡或流式細胞實驗中結合這些染料可以同時評估多個參數。

通常,可視化或檢測樣本中存在的所有細菌非常有用,無論其種類或代謝狀態如何。為此,我們提供了一系列染料,這些染料通??梢匀旧屑毦?,包括革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。這些染料有多種顏色和區域可供選擇:

  • 熒光革蘭氏染色

傳統的比色革蘭氏染色方案非常費力,需要多達5種不同的溶液來染色細胞,包括有毒酒精和丙酮來使樣品脫色,并且需要精確的時間安排。相比之下,小麥胚芽凝集素 (WGA) 已被證明與革蘭氏陽性菌細胞壁肽聚糖層中的N-乙酰氨基葡萄糖特異性結合,并且可以用多種不同的熒光染料進行標記,用于一步熒光細胞標簽。我們提供13種顏色選項的熒光WGA偶聯物,以及組合革蘭氏染色/活性試劑盒和 DNA 染料。

Biotium 提供一系列不同的熒光活力染料和試劑盒,以允許通過顯微鏡或流式細胞術區分活細胞和死細胞(參見下面的活力PCR 部分, 了解通過qPCR檢測活細菌)

?細菌活力染色

 

3、活力PCR (Viability PCR,v-PCR)通過PCR定量測定微生物活性

Viability PCR 是一種靈敏、快速檢測活微生物的強大技術。與耗時的培養方法不同,qPCR 是一種快速且靈敏的檢測方法。然而,正常的 qPCR 不能區分活細胞和死細胞。通過使用PMAxx™或PMA的v-PCR,您可以獲得PCR的速度、靈敏度和特異性,以及對細胞活性水平進行量化。由于不需要培養,您甚至可以檢測活的但不可培養的細菌?(VBNC) 。v-PCR技術不僅可以應用于細菌,還可以應用于酵母、病毒、真核生物和古細菌等其他生物。?

 

  • v-PCR 是如何工作的?

下面的信息圖顯示了v-PCR的作用機制,PMAxx™和PMA是對DNA具有高親和力的光反應染料,染料嵌入dsDNA并在強烈的可見光下形成共價鍵。該反應通過在純化過程中去除修飾的DNA和抑制DNA聚合酶的模板擴增的組合來抑制修飾的DNA的PCR 擴增。因為染料是細胞膜不滲透性的,所以當用染料處理含有活細菌和死細菌的樣品時,只有細胞膜受損的死細菌的DNA才能夠被修飾,在后續的qPCR反應中,死細胞DNA將表現出延遲擴增同時比活細胞顯示出更高的Ct值。

PMA和PMAxx™的作用機制

 

  • 用于活性PCR的PMA和PMAxx™染料

PMA是Biotium為v-PCR開發的原始染料,它已在多種細菌菌株以及酵母和病毒中得到驗證(參見PMA引用文獻)。然而,雖然PMA通??赏ㄟ^qPCR有效區分活細菌和死細菌,但它并不能完全消除死細胞 DNA 中的 PCR 產物。這可能會產生假陽性結果。

PMAxx™由Biotium科學家設計,旨在成為PMA的卓越替代品。PMAxx™在消除死細胞DNA的PCR擴增方面更有效,因此可以最好地區分活細菌和死細菌。

 

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