瓊脂糖/磁珠偶聯Flag標簽抗體,IP利器

什么情況下會選擇標簽抗體用于免疫沉淀呢?

當某些目標蛋白沒有對應的特異性抗體(eg.抗體所識別的抗原表位被相互作用蛋白所遮蔽,無法與目的蛋白相互作用或抗體選擇不合適,所選抗體不能識別處于天然構象的蛋白)而無法進行免疫沉淀時,可以采用一個表位標記蛋白后,再選擇針對此表位的標簽抗體來進行免疫沉淀。

 

什么樣的標簽適合用于免疫沉淀呢?

Flag(DDDDK)標簽是一個與重組蛋白相融合的由 8個親水氨基酸(DYKDDDDK)組成的多肽片斷。Flag標簽只有8個氨基酸組成,因此它不會占據其他表位與結合域,避免導致融合蛋白的功能、分泌性以及轉運發生改變。由于它的親水性特點,Flag標簽傾向于定位在融合蛋白表面,因此更易與抗體結合以及被腸激酶酶解。

Flag標簽系統是已被公認的用于表達、純化以及檢測融合蛋白的表達系統,廣泛應用于Western blotting、免疫細胞組化、免疫共沉淀、流式細胞術、蛋白純化以及蛋白相互作用、蛋白分離等多個研究領域。

 

瓊脂糖&磁珠偶聯的Flag標簽抗體

 

為什么推薦使用Flag標簽抗體偶聯的瓊脂糖/磁珠?

與使用Protein A/G瓊脂糖的傳統免疫沉淀(IP)方法相比,Abbkine的瓊脂糖/磁珠偶聯標簽抗體,省去了Protein A/G與抗原-抗體復合物結合的步驟。偶聯抗體直接和目標蛋白結合后,通過離心或使用磁力架,將目標蛋白從細胞裂解液中分離出來。不僅讓實驗變得簡單快捷,更可以避免非特異性結合,降低背景。表位標記蛋白的免疫沉淀可用于確定蛋白的細胞定位、研究翻譯后修飾或檢測標記蛋白與其它蛋白之間的相互作用。

 

  • 看到這里,您肯定會問,Protein A/G的缺點是什么?
  1. 耗時:使用Protein A/G需要額外的孵育與洗滌操作
  2. 效果差:當抗體種屬、亞型和ProteinA/G不匹配時,ProteinA/G和抗體結合能力弱
  3. 背景高:和樣本中的其他免疫球蛋白結合,產生非特異性結合,導致高背景

 

這就是為您推薦瓊脂糖/磁珠偶聯Flag標簽抗體的原因:

 

產品名稱 貨號 應用
Anti-DDDDK Tag Mouse Monoclonal Antibody, 瓊脂糖 A02010AGB IP
Anti-DDDDK Tag Mouse Monoclonal Antibody, 磁珠 A02010MGB IP

 

瓊脂糖&磁珠偶聯的Flag標簽抗體

 

瓊脂糖/磁珠偶聯Flag標簽抗體,優勢更加突出:

 

  • 高特異性—高特異性單克隆標簽抗體可實現高產量和高純度免疫沉淀
  • 低背景—穩定、預封閉的填料及特異性抗體減少了免疫沉淀過程中的非特異性結合
  • 規格靈活:100ul, 400ul, 2ml,多規格可供選擇。滿足不同規模的免疫沉淀需求
  • 操作方便—產品說明書提供了免疫沉淀優化方案,一次免疫沉淀時間約1 - 2小時
  • 兼容性強—填料可以兼容手動及自動化操作

 

瓊脂糖/磁珠偶聯Flag標簽抗體使用說明:

  • 瓊脂糖微球是多孔的,這使得它們具有高的表面積與蛋白質相互接觸,并可以容納大量的液體。在純化大量蛋白的時候,傳統的瓊脂糖微球偶聯抗體是IP實驗的完美選擇。(瓊脂糖:每個樣品加入20ul懸液)
  • 在IP實驗中,由于所有的相互作用均發生在磁珠的外表面,并且磁珠的尺寸更均一,所以磁珠的可重復性和純度通常高于瓊脂糖。磁性分離不需要離心和多次洗滌,且孵育時間短,在日常小規模、快速處理多個樣品的IP實驗時,磁珠偶聯抗體更簡單、更快速。(磁珠:每個樣品加入10-20ul懸液)
  • 提供形式:液體(抗體-瓊脂糖/磁珠復合物:保護液=1:1,50%的懸浮液)
  • 儲存方式:4°C可保存一年,瓊脂糖偶聯標簽抗體避免凍融和渦旋;磁珠偶聯標簽抗體避免凍融和離心

 

瓊脂糖/磁珠偶聯Flag標簽抗體說明書

瓊脂糖偶聯Flag標簽抗體https://www.abbkine.com/datasheet/A02010AGB.pdf

磁珠偶聯Flag標簽抗體:https://www.abbkine.com/datasheet/A02010MGB.pdf

 

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