如何快速檢測同一細胞群中的活細胞和死細胞-活死細菌染色試劑盒

前情回顧:Biotium:微生物(細菌,真菌&酵母)熒光染色及活力檢測全套工具

 

產品描述

BiotiumViability/Cytotoxicity Assay Kit for Bacteria Live & Dead Cells(30027)通過兩個DNA探針DMAO和EthD-III對活細菌(綠色)和死細菌(紅色)進行雙色熒光染色。DMAO 是一種綠色熒光核酸染料,可對活細菌和死細菌進行染色。Ethidium Homodimer III (EthD-III) 是一種紅色熒光核酸染料,可選擇性地對細胞膜受損的死細菌進行染色。當用 DMAO 和 EthD-III 的混合物染色時,細胞膜完整的細菌會發出綠色熒光,而細胞膜受損的細菌會發出紅色熒光。該試劑盒適用于熒光顯微鏡和流式細胞儀。檢測原理是通用的,適用于大多數細菌類型。用于100次流式細胞檢測或1000次顯微鏡檢測。
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DMAO 和 EthD-III 的混合物染色

 

特征

  • 檢測同一細胞群中的活細胞和死細胞
  • 簡單、快速的免洗染色
  • 用于熒光顯微鏡或流式細胞術

 

產品推薦

名稱 貨號 規格
Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Bacteria Live & Dead Cells
細菌活細胞和死細胞活力/細胞毒性檢測試劑盒
30027 1000 assays

DMAO,5 mM 溶液(2 x 100 uL)

EthD-III,2 mM 溶液(2 x 150 uL)

 

 

1、儲存和處理

在4℃下避光儲存,按推薦儲存條件,產品的穩定期限至少為收到日期后的2年。DMAO和EthD-III染料與核酸結合。

 

2、光譜特性

DMAO:Ex/Em:503/530nm(與DNA共存時)

乙溴化二聚體III(EthD-III):Ex/Em:532/625nm*(與DNA共存時)

*EthD-III在279nm處也有強烈的紫外吸收峰

 

3、分析方案

1)熒光顯微鏡染色方案

  • 將染料儲備溶液加熱至室溫,并振蕩混合。
  • 通過將1微升DMAO、2微升EthD-III和8微升150毫摩爾氯化鈉(參見分析注意事項#2)組合,制備100倍濃度的染色溶液。振蕩以確保充分混合。
    注意:根據需要,體積可以按比例調整。
  • 在微離心管中,通過以10,000 x g離心5分鐘并去除上清液來收集細菌細胞。
  • 可選:用150毫摩爾氯化鈉洗滌細胞一次,通過上下移液數次。
  • 通過以10,000 x g離心5分鐘并去除上清液來沉淀細菌細胞。
  • 在150微摩爾氯化鈉中重新懸浮細胞100微升。
  • 向100微升細菌懸浮液中加入1微升染料混合物。
  • 輕輕混合,并在避光條件下室溫孵育15分鐘。
  • 將樣品中的5微升轉移到玻片上,涂上玻璃蓋片,并用CoverGrip Coverslip Sealant(23005)或指甲油密封。
  • 通過熒光顯微鏡對標記的細胞進行成像。DMAO可以使用FITC濾光片組進行成像,EthD-III可以使用Texas Red?或Cy?3濾光片組進行成像。

 

2)流式細胞術染色方案

①. 按照上述熒光顯微鏡染色方案的步驟①-⑧進行操作。
注意:我們建議還制備僅用DMAO染色的死細胞和僅用EthD-III染色的死細胞的單染細菌樣品。

②. 加入0.5ml流式細胞術分析中的常用緩沖液。

③. 進行流式細胞術分析,檢測FITC通道中的DMAO,以及PE或PE-Texas Red?通道中的EthD-III。

 

Biotium公司是一家在熒光技術領域獨樹一幟的生物技術公司,公司位于美國加利福尼亞的BAY AREA------世界上首要的生物科技中心。該公司一直致力于開發和生產用于生物醫學研究的熒光指示劑及其他特殊生化產品。其產品被廣泛應用于細胞生 物學、蛋白質組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經科學、血液流動檢測及大規模藥物篩選等眾多領域。Biotium公司專利產品眾多,包括已經被廣泛使用的實時PCR定量熒光染料EvaGreen、具有劃時代意義的凝膠核酸染料Gel Red和GelGreen,以及最新推出的Cheetah Taq熱啟動酶和CF系列蛋白質標記染料等。

 

目前,Biotium已將其許多專利技術授權給一些主要的國際生物技術公司,包括安捷倫、BD生物科學、Biolegend、BioRad、EMD Millipore、Illumina、PerkinElmer、Qiagen、Roche、Sartorius AG、Sigma-Aldrich、Thermo Fisher Scientific等。 ? 寶天生物科技(BTProbes)由美國知名熒光試劑企業Biotium公司于2007年在華成立,是一家專注于生物熒光試劑研發的高科技企業,是多家歐美企業長期供貨商,產品被廣泛應用于生命科學各個領域。目前寶天可提供超過100款熱賣的熒光蛋白(PE, APC),其他熒光原料(FITC),用于PCR熒光原料(5-FAM,6-TAMRA)等。

 

作為Biotium在中國的區域總代理,艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供最全面的Biotium的產品。

 

艾美捷科技優勢代理品牌

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